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烟草提取物,砷和丙烯醛对DNA错配修复系统的影响及机理

论文创新点第1-6页
中文摘要第6-8页
Abstract第8-16页
第一章 引言第16-27页
   ·DNA错配修复第16-21页
     ·简介第16-17页
     ·错配修复系统能改正生物合成中产生的错误第17-21页
       ·真核细胞中的错配修复第17-20页
       ·DNA错配修复和肿瘤第20-21页
       ·DNA错配修复系统的应用第21页
   ·烟草提取物第21-23页
   ·砷第23-25页
   ·丙烯醛第25-27页
第二章 材料和方法第27-62页
   ·构建T-G错配底物第27-38页
     ·实验原理第27页
     ·材料第27-30页
       ·菌种和噬菌体第27页
       ·酶及主要化学试剂第27-28页
       ·主要溶液的配置第28-30页
       ·实验仪器第30页
     ·方法第30-38页
       ·大肠杆菌XL1Blue菌株阳性检测第30-31页
       ·培养单克隆XL1Blue菌第31页
       ·噬菌体浓度测定第31页
       ·噬菌体的鉴定第31-32页
       ·噬菌体再扩大培养(50 ml培养基)第32-33页
       ·噬菌体再扩大培养(3 L培养基)第33页
       ·分离f1MR3噬菌体的双链DNA第33-34页
       ·分离f1MR1噬菌体单链DNA第34-35页
       ·同源双链分子和异源双链分子的准备第35-36页
       ·HAP层析柱第36页
       ·ExoV消化双链线性DNA第36-37页
       ·S-500层析柱第37-38页
   ·细胞培养和细胞核蛋白的提取第38-43页
     ·实验原理第38页
     ·材料第38-40页
       ·细胞第38页
       ·主要化学试剂第38页
       ·主要溶液的配置第38-40页
       ·主要仪器第40页
     ·细胞培养第40-43页
       ·细胞复苏第40-41页
       ·细胞传代第41-42页
       ·细胞冻存第42页
       ·抽提Hela细胞核抽提物第42-43页
   ·DNA错配修复第43-47页
     ·实验原理第43页
     ·材料第43-45页
       ·底物和核抽提物第43-44页
       ·酶及主要化学试剂第44页
       ·主要溶液配制第44-45页
       ·主要仪器第45页
     ·人类DNA错配修复检验方法第45-46页
       ·反应第45-46页
       ·平衡酚抽提第46页
       ·乙醇沉淀第46页
       ·酶切检测第46页
     ·错配修复反应预期结果第46-47页
   ·Southern Blot实验第47-51页
     ·实验原理第47页
     ·材料第47-49页
       ·主要溶液配制第48-49页
       ·主要仪器第49页
     ·变性胶的配制第49页
     ·变性胶电泳及转膜第49-50页
     ·Southern杂交具体过程第50-51页
       ·探针的标记第50页
       ·探针杂交第50-51页
   ·Western杂交第51-55页
     ·实验原理第51页
     ·材料第51-53页
       ·主要溶液配制第51-53页
       ·主要仪器第53页
     ·跑胶转膜杂交第53-55页
       ·配胶第53-54页
       ·样品的制备第54-55页
       ·跑胶转膜和杂交第55页
   ·免疫沉淀反应第55-56页
     ·实验原理第55页
     ·材料第55-56页
       ·主要溶液的配制第55-56页
       ·主要仪器第56页
     ·实验过程第56页
   ·蛋白纯化第56-62页
     ·实验原理第56页
     ·主要仪器第56-57页
     ·PCNA和P21C纯化第57-58页
       ·溶液的配制第57-58页
       ·实验过程第58页
     ·MutSα和MutLα的纯化第58-62页
       ·主要溶液的配制第58-60页
       ·实验过程第60-62页
第三章 实验结果和讨论第62-83页
   ·烟草抽提物通过影响PCNA的功能而影响DNA错配修复第62-66页
     ·烟草抽提物通过影响PCNA功能而影响DNA错配修复第62-64页
     ·烟草提取物抑制PCNA在起始反应中的功能而抑制DNA错配修复第64-65页
     ·烟草提取物抑制PCNA在合成反应中的作用第65-66页
   ·砷通过PCNA磷酸化影响DNA错配修复功能第66-74页
     ·砷在体内和体外都会抑制DNA错配修复功能第66-67页
     ·砷通过影响PCNA的功能而抑制DNA错配修复功能第67-68页
     ·砷抑制PCNA在起始反应中的作用第68-69页
     ·砷通过影响PCNA在合成反应中的功能而延迟合成反应第69-71页
     ·砷在体内或体外造成PCNA 211位点酪氨酸磷酸化第71-72页
     ·砷通过影响PCNA磷酸化而影响肺癌细胞中的DNA错配修复第72-74页
   ·烟草提取物可以与砷协同作用抑制DNA错配修复第74-75页
     ·烟草提取物可以与砷协同作用抑制DNA错配修复第74-75页
     ·烟草提取物可以与砷协同作用抑制DNA错配修复中的合成反应第75页
   ·丙烯醛通过影响MutLα的功能影响DNA错配修复第75-83页
     ·丙烯醛在体内和体外都抑制DNA错配修复第75-76页
     ·丙烯醛通过影响MutLα功能而抑制DNA错配修复第76-77页
     ·丙烯醛抑制MLH1在A549细胞体内表达第77-78页
     ·丙烯醛造成MLH1交联第78-79页
     ·质谱检测丙烯醛处理后的MutLα蛋白和细胞中的MutLα修饰第79-83页
第四章 讨论第83-87页
参考文献第87-93页
科研成果第93-94页
英文缩写对照表第94-95页
致谢第95-96页

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