| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 引言 | 第15-16页 |
| 第一章 朊蛋白及朊病毒疾病概述 | 第16-43页 |
| 引言 | 第16-17页 |
| 1. 朊病毒的发现及概念的提出 | 第17-18页 |
| 2. 朊病毒蛋白的生物学特征 | 第18-21页 |
| ·朊病毒蛋白的基因结构及转录调控 | 第18-19页 |
| ·朊病毒蛋白的一级结构 | 第19-20页 |
| ·朊病毒蛋白的二、三级结构 | 第20-21页 |
| 3. 朊病毒蛋白的构象转变 | 第21-23页 |
| ·PrP~(Sc)与PrP~C为同源异构体 | 第21-22页 |
| ·PrP~(Sc)与PrP~C间构象的转变 | 第22-23页 |
| 4. 正常朊蛋白的细胞内功能 | 第23-25页 |
| ·朊蛋白的抗细胞凋亡活性 | 第23-24页 |
| ·PrP~C与氧化压力 | 第24页 |
| ·朊蛋白与跨膜信号传递 | 第24-25页 |
| ·PrP~C与细胞间粘附 | 第25页 |
| 5. 朊病毒的致病机制 | 第25-31页 |
| ·PrP~(Sc)的神经毒性:获得功能假说 | 第26-28页 |
| ·PrP~C的生理学功能和朊病毒疾病:PrP~C丧失其有益的功能 | 第28-30页 |
| ·PrP~C功能的转变 | 第30-31页 |
| 6. 蛋白质聚集过程中的寡聚化及其细胞毒性 | 第31-38页 |
| ·蛋白质寡聚化是聚集过程中不可避免的步骤 | 第32-34页 |
| ·蛋白质的寡聚体及其细胞毒性研究进展 | 第34-38页 |
| ·Aβ蛋白的寡聚体 | 第34-35页 |
| ·α-突触核蛋白的寡聚体 | 第35-37页 |
| ·哺乳动物朊蛋白的寡聚体 | 第37页 |
| ·酵母朊蛋白的寡聚体 | 第37-38页 |
| 7. 朊病毒的检测与防治 | 第38-41页 |
| ·朊病毒的检测 | 第38-40页 |
| ·朊病毒的防治 | 第40-41页 |
| ·朊病毒的预防策略 | 第40-41页 |
| ·朊病毒的治疗策略 | 第41页 |
| 8. 展望 | 第41-43页 |
| 第二章 细胞内大分子拥挤环境概述 | 第43-52页 |
| 引言 | 第43页 |
| 1. 大分子拥挤环境的提出 | 第43-44页 |
| 2. 大分子拥挤环境的基本概念及其特点 | 第44-45页 |
| 3. 大分子拥挤环境效应的理论预测 | 第45-46页 |
| 4. 大分子拥挤环境效应的非线性化 | 第46-47页 |
| 5. 大分子拥挤环境效应的反作用效果 | 第47-48页 |
| 6. 大分子拥挤环境的实际效应 | 第48-50页 |
| ·大分子在细胞内的扩散系数 | 第48页 |
| ·大分子拥挤环境加强蛋白质问的结合 | 第48-49页 |
| ·大分子拥挤环境促进蛋白质的折叠与聚集 | 第49-50页 |
| ·大分子拥挤环境促进分子伴侣的作用 | 第50页 |
| 7. 展望 | 第50-52页 |
| 第三章 rPrP23-231的克隆与rPrP23-231和80R插入突变型朊蛋白的表达与纯化 | 第52-72页 |
| 引言 | 第52页 |
| 1. 实验材料 | 第52-58页 |
| ·实验仪器 | 第52-53页 |
| ·实验材料与耗材 | 第53-55页 |
| ·缓冲液、溶液及培养基配方 | 第55-58页 |
| 2. 实验方法 | 第58-67页 |
| ·rPrP23-231表达载体的构建 | 第58-64页 |
| ·目的片段PrP23-231的扩增 | 第58-60页 |
| ·表达载体的构建 | 第60-64页 |
| ·rPrP23-231的表达与纯化 | 第64-66页 |
| ·诱导表达pET30a-PrP23-231 | 第64页 |
| ·包涵体的收集与洗涤 | 第64-65页 |
| ·NTA-Ni~(2+)亲和纯化及柱上复性蛋白 | 第65页 |
| ·镍亲和层析柱的再生 | 第65-66页 |
| ·SDS-PAGE电泳检查 | 第66页 |
| ·rPrP~(8OR)的表达与纯化 | 第66-67页 |
| 3. 实验结果 | 第67-70页 |
| ·rPrP23-231表达载体的构建 | 第67-68页 |
| ·目的片段PrP23-231的扩增 | 第67-68页 |
| ·PrP23-231重组质粒的鉴定 | 第68页 |
| ·rPrP23-231与rPrP~(8OR)的表达与纯化 | 第68-70页 |
| 4. 讨论 | 第70-72页 |
| 第四章 大分子拥挤环境对朊蛋白结构和热稳定性的影响 | 第72-85页 |
| 引言 | 第72页 |
| 1. 实验材料 | 第72-74页 |
| ·实验仪器 | 第72-73页 |
| ·实验材料与试剂 | 第73页 |
| ·缓冲液配置 | 第73-74页 |
| 2. 实验方法 | 第74-76页 |
| ·蛋白质缓冲液的置换 | 第74页 |
| ·透析袋的预处理 | 第74页 |
| ·蛋白质透析 | 第74页 |
| ·蛋白质的浓缩与浓度计算 | 第74-75页 |
| ·朊蛋白二级结构及其热稳定性的测定 | 第75-76页 |
| ·蛋白质二级结构的测定 | 第75页 |
| ·蛋白质热稳定性的测量 | 第75页 |
| ·圆二色光谱仪比色杯的洗涤 | 第75-76页 |
| 3. 实验结果 | 第76-82页 |
| ·蛋白质的浓度测定 | 第76页 |
| ·大分子拥挤环境对rPrP23-231的影响 | 第76-79页 |
| ·稀释溶液中rPrP23-231常温、热变性和重折叠后的二级结构 | 第76-77页 |
| ·大分子拥挤环境中rPrP23-231常温、热变性和重折叠后的二级结构 | 第77-78页 |
| ·rPrP23-231在稀释溶液和大分子拥挤环境中θ_(218)/θ_(207)值随温度的变化 | 第78-79页 |
| ·大分子拥挤环境对rPrP23-231热稳定性的影响 | 第79页 |
| ·大分子拥挤环境对rPrP~(8OR)的影响 | 第79-81页 |
| ·稀释溶液中rPrP~(8OR)常温、热变性和重折叠后的二级结构 | 第79-80页 |
| ·大分子拥挤环境中rPrP~(8OR)常温、热变性和重折叠后的二级结构 | 第80页 |
| ·大分子拥挤环境对rPrP~(8OR)热稳定性的影响 | 第80-81页 |
| ·大分子拥挤环境对溶菌酶的影响 | 第81-82页 |
| ·稀释溶液中溶菌酶常温、热变性和重折叠后的二级结构 | 第81-82页 |
| ·大分子拥挤环境中溶菌酶常温、热变性和重折叠后的二级结构 | 第82页 |
| ·大分子拥挤环境对溶菌酶热稳定性的影响 | 第82页 |
| 4. 讨论 | 第82-85页 |
| 第五章 大分子拥挤环境对朊蛋白可溶性寡聚体形成和毒性产生的影响 | 第85-97页 |
| 引言 | 第85页 |
| 1. 实验材料 | 第85-87页 |
| ·实验仪器 | 第85-86页 |
| ·实验材料与试剂 | 第86页 |
| ·溶液与培养基的配置 | 第86-87页 |
| 2. 实验方法 | 第87-91页 |
| ·紫外分光光度计测定rPrP23-231样品的浊度 | 第87页 |
| ·静态光散射法测定rPrP23-231的聚集状态 | 第87-88页 |
| ·高效液相色谱(HPLC)分析rPrP23-231的聚集状态 | 第88页 |
| ·ThT和ANS荧光的测定 | 第88页 |
| ·rPrP23-231可溶性寡聚体部分抗蛋白酶K消化特性的分析 | 第88-89页 |
| ·rPrP23-231寡聚体神经毒性的测定 | 第89-91页 |
| ·神经瘤母细胞的培养 | 第89-90页 |
| ·MTS法测定朊蛋白寡聚体对神经瘤母细胞的毒性 | 第90-91页 |
| 3. 实验结果 | 第91-95页 |
| ·浊度法和静态光散射法测定rPrP 23-231的聚集状态 | 第91页 |
| ·高效液相色谱(HPLC)分析rPrP 23-231的聚集状态 | 第91-92页 |
| ·rPrP23-231的可溶性寡聚体形态与荧光染料ThT和ANS的结合实验 | 第92-93页 |
| ·可溶性寡聚体朊蛋白的部分抗蛋白酶消化能力的测定 | 第93-94页 |
| ·可溶性朊蛋白寡聚体对神经瘤母细胞的毒性分析 | 第94-95页 |
| 4. 讨论 | 第95-97页 |
| 研究总结 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-114页 |
| 博士期间发表的论文 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
