| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-9页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 1 绪论 | 第10-18页 |
| ·简介 | 第10-11页 |
| ·植物过氧化物酶研究现状 | 第11-13页 |
| ·植物过氧化物酶简介 | 第11页 |
| ·植物过氧化物酶的分类 | 第11-12页 |
| ·植物过氧化物酶在基因工程方面的研究进展 | 第12-13页 |
| ·紫花苜蓿基因工程抗逆性研究现状 | 第13-17页 |
| ·转基因苜蓿抗盐性研究现状 | 第14页 |
| ·转基因苜蓿抗病虫害研究进展 | 第14-15页 |
| ·转基因苜蓿抗寒及抗旱研究进展 | 第15-16页 |
| ·转基因苜蓿抗酸铝害作用 | 第16页 |
| ·转基因苜蓿的抗氧化作用 | 第16-17页 |
| ·本课题研究的目的及内容 | 第17-18页 |
| ·研究目的 | 第17页 |
| ·研究内容 | 第17-18页 |
| 2 紫花苜蓿MSPOD基因的克隆 | 第18-29页 |
| ·实验材料 | 第18页 |
| ·植物材料 | 第18页 |
| ·菌株和试剂 | 第18页 |
| ·实验仪器 | 第18页 |
| ·引物设计及合成 | 第18页 |
| ·实验方法 | 第18-22页 |
| ·实验材料的获取 | 第18页 |
| ·紫花苜蓿总RNA的提取 | 第18-19页 |
| ·反转录合成第一链cDNA | 第19页 |
| ·PCR反应 | 第19-20页 |
| ·PCR产物的切胶回收 | 第20页 |
| ·克隆载体与目的片段连接 | 第20-21页 |
| ·转化TransTl菌株 | 第21页 |
| ·筛取阳性克隆 | 第21页 |
| ·菌体PCR鉴定 | 第21-22页 |
| ·克隆结果与分析 | 第22-28页 |
| ·提取紫花苜蓿总的RNA | 第22页 |
| ·紫花苜蓿MsPOD基因的获取 | 第22-23页 |
| ·菌体PCR检测结果 | 第23页 |
| ·紫花苜蓿MsPOD基因序列分析 | 第23-28页 |
| ·讨论 | 第28-29页 |
| 3 MSPOD基因表达分析 | 第29-34页 |
| ·实验仪器 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-30页 |
| ·设计引物 | 第29页 |
| ·获取材料 | 第29页 |
| ·Real-time RT-PCR检测MsPOD基因 | 第29-30页 |
| ·结果及分析 | 第30-33页 |
| ·MsPOD组织差异性表达分析 | 第30-31页 |
| ·不同时间条件下MsPOD基因在NaCl胁迫下的表达情况 | 第31页 |
| ·不同时间条件下在ABA胁迫下MsPOD基因的表达情况 | 第31-32页 |
| ·GA3在不同时间段处理幼苗MsPOD基因的表达情况 | 第32页 |
| ·MeJA胁迫下MsPOD基因的表达情况 | 第32页 |
| ·H_2O_2处理下MsPOD基因的表达情况 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| 4 MSPOD基因超表达载体的构建 | 第34-41页 |
| ·实验材料,实验试剂及实验仪器 | 第34页 |
| ·实验菌株及载体 | 第34页 |
| ·溶液及培养基的配置 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-37页 |
| ·设计引物 | 第34页 |
| ·扩增目的片段 | 第34-35页 |
| ·将扩增产物进行回收以及与克隆载体的连接转化 | 第35页 |
| ·质粒的提取 | 第35-36页 |
| ·对质粒进行双酶切 | 第36-37页 |
| ·酶切目的产物进行切胶回收 | 第37页 |
| ·目的片段与超表达载体连接及转化 | 第37页 |
| ·结果及分析 | 第37-41页 |
| ·目的片段克隆 | 第39页 |
| ·克隆载体以及表达载体双酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 5 MSPOD基因对拟南芥的转化 | 第41-49页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·植物材料 | 第41页 |
| ·菌株及载体 | 第41页 |
| ·溶液和培养基配置 | 第41-42页 |
| ·试验方法 | 第42-45页 |
| ·制备农杆菌感受态 | 第42页 |
| ·农杆菌转化及鉴定 | 第42页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥转化 | 第42-43页 |
| ·转基因拟南芥的鉴定 | 第43-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-48页 |
| ·转基因拟南芥的获取 | 第45-46页 |
| ·转基因拟南芥PCR检测 | 第46-47页 |
| ·RT-PCR检测 | 第47页 |
| ·GUS染色 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| 6 紫花苜蓿MSPOD基因亚细胞定位 | 第49-54页 |
| ·实验材料 | 第49页 |
| ·菌株材料 | 第49页 |
| ·载体及酶 | 第49页 |
| ·培养基的配置 | 第49页 |
| ·实验仪器 | 第49页 |
| ·引物设计 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-51页 |
| ·构建重组质粒 | 第49-50页 |
| ·金粉的制备 | 第50-51页 |
| ·子弹的制备 | 第51页 |
| ·洋葱表皮准备 | 第51页 |
| ·重组质粒pA7-POD对洋葱表皮的转化 | 第51页 |
| ·结果和分析 | 第51-54页 |
| ·pA7-POD表达载体的构建及鉴定 | 第51-52页 |
| ·MsPOD基因的亚细胞定位 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| 7 结论及展望 | 第54-55页 |
| ·实验结果 | 第54页 |
| ·创新点 | 第54页 |
| ·展望 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 作者简介 | 第61页 |
