| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第1章 绪论(干细胞领域的趋势和进展) | 第12-27页 |
| ·干细胞概述和干细胞研究的趋势与进展 | 第12-22页 |
| ·Tfe3的核质穿梭决定了干细胞的幼稚态 | 第14-15页 |
| ·从混沌到有序——单细胞技术解析重编程分子机制 | 第15-16页 |
| ·DNA去甲基化酶Tet1在重编程中替代Oct4,调节成体神经发生和学习记忆 | 第16-17页 |
| ·H3K9甲基化是体细胞重编程的重要障碍 | 第17页 |
| ·体细胞重编程EMT-MET顺序化机理 | 第17-18页 |
| ·重编程的“跷跷板模型”——新型体细胞重编程因子 | 第18页 |
| ·化合物诱导小鼠iPS | 第18页 |
| ·人iPS细胞向肝芽组织的分化、肝脏干细胞的体外分离及转分化获取肝脏干细胞 | 第18-19页 |
| ·人多能干细胞体外自发形成眼球光学视杯/神经视网膜及转分化获得神经干细胞 | 第19-20页 |
| ·重大突破——人类治疗性克隆胚胎干细胞建系成功 | 第20-21页 |
| ·小鼠孤雄单倍体干细胞的建立 | 第21页 |
| ·lincRNA调控胚胎干细胞自我更新 | 第21-22页 |
| ·非整合诱导人类iPS细胞的技术体系 | 第22-27页 |
| ·多种类型体细胞可用于诱导iPS细胞 | 第22-23页 |
| ·各种病毒诱导技术及非整合诱导技术的比较 | 第23-25页 |
| ·本论文研究的课题——建立非整合诱导技术体系下的iPS细胞库 | 第25-27页 |
| 第2章 实验方法与实验材料 | 第27-56页 |
| ·尿液细胞的收集、培养与增殖检测 | 第27-29页 |
| ·实验试剂及实验材料 | 第27页 |
| ·尿液细胞的收集方法 | 第27-28页 |
| ·收集尿液细胞时的注意事项 | 第28页 |
| ·尿液细胞的培养及传代 | 第28页 |
| ·Edu检测尿液细胞增殖情况 | 第28-29页 |
| ·低内毒素质粒的大量制备 | 第29-30页 |
| ·使用LONZA电转仪及试剂盒电转尿液细胞或人皮肤成纤维细胞 | 第30-31页 |
| ·实验仪器及实验材料 | 第30页 |
| ·人尿液细胞的电转 | 第30-31页 |
| ·人皮肤成纤维细胞的电转 | 第31页 |
| ·pCEP4-hsa-miR-302-367 cluster质粒的构建与在真核细胞中的过表达检测 | 第31-35页 |
| ·实验仪器及实验材料 | 第31页 |
| ·pCEP4-hsa-miR-302-367 cluster质粒的构建 | 第31-33页 |
| ·pCEP4-hsa-miR-302-367 cluster质粒的过表达 | 第33页 |
| ·miR-302-367 cluster表达的定量检测 | 第33-35页 |
| ·人诱导多能干细胞系的建立 | 第35-40页 |
| ·实验仪器及实验材料 | 第35-36页 |
| ·人诱导多能干细胞克隆的挑取 | 第36页 |
| ·人诱导多能干细胞的扩增和培养 | 第36-38页 |
| ·人诱导多能干细胞分化的处理方法 | 第38-39页 |
| ·人诱导多能干细胞的冻存 | 第39-40页 |
| ·人诱导多能干细胞的复苏 | 第40页 |
| ·人诱导多能干细胞的鉴定 | 第40-49页 |
| ·碱性磷酸酶染色 | 第40-41页 |
| ·核型鉴定 | 第41页 |
| ·免疫荧光(Immunofluorescence) | 第41-42页 |
| ·流式细胞法 | 第42-43页 |
| ·实时定量PCR检测(real-time qPCR) | 第43-45页 |
| ·启动子甲基化检测 | 第45-48页 |
| ·拟胚体(Embryonic body,EB)形成实验 | 第48页 |
| ·畸胎瘤生成检测 | 第48-49页 |
| ·BIO-RAD电转仪电转方法 | 第49页 |
| ·使用的培养基配方及配制方法 | 第49-53页 |
| ·所使用主要试剂信息列表 | 第53-54页 |
| ·本文中所使用引物列表 | 第54-56页 |
| 第3章 人尿液分离细胞库 | 第56-65页 |
| ·尿液细胞是用于建立人诱导多能干细胞库的良好供体细胞 | 第56-57页 |
| ·细胞可以从健康人和多种疾病患者以及不同年龄捐赠者的尿液中分离得到 | 第57-60页 |
| ·部分遗传疾病患者尿液细胞的检测 | 第60-63页 |
| ·肌萎缩性侧索硬化相关基因的检测 | 第60页 |
| ·Alport综合征相关基因的检测 | 第60页 |
| ·β地中海贫血相关基因的检测 | 第60-63页 |
| ·尿液细胞的增殖情况测定 | 第63-65页 |
| 第4章 尿液细胞来源的非整合无饲养层人诱导多能干细胞重编程方法的建立 | 第65-74页 |
| ·Episome可以通过电转的方式以较高效率被导入尿液细胞 | 第65-66页 |
| ·尿液细胞可以在成分确定的人多能干细胞培养基中存活 | 第66-67页 |
| ·尿液细胞可以在无饲养层细胞及成分确定人多能干细胞培养基的条件下,通过episome诱导得到人iPS细胞 | 第67-72页 |
| ·尿液细胞可通过电转pEP4E02SET2K+pCEP4-M2L得到人诱导多能干细胞 | 第68-69页 |
| ·单独电转pEP4E02SET2K并不能使尿液细胞重编程 | 第69页 |
| ·组合中的LIN28和c-MYC可被microRNA-302-367 cluster代替得到更为安全的人诱导多能干细胞 | 第69-71页 |
| ·人皮肤成纤维细胞电转pEP4E02SET2K+pCEP4-has-miR-302-367 cluster无法得到人诱导多能干细胞 | 第71-72页 |
| ·尿液细胞比起人皮肤成纤维细胞在诱导iPS细胞方面更有优势 | 第72-74页 |
| 第5章 尿液细胞来源非整合人多能干细胞库的建立与鉴定 | 第74-85页 |
| ·人诱导多能干细胞系的获得 | 第74-75页 |
| ·人诱导多能干细胞的鉴定 | 第75-82页 |
| ·碱性磷酸酶染色 | 第75页 |
| ·插入鉴定 | 第75-76页 |
| ·核型鉴定 | 第76-77页 |
| ·多能性相关基因表达量的检测 | 第77-78页 |
| ·免疫荧光染色 | 第78页 |
| ·流式细胞检测 | 第78-79页 |
| ·启动子甲基化检测 | 第79-80页 |
| ·拟胚体体外分化 | 第80-81页 |
| ·畸胎瘤形成 | 第81-82页 |
| ·尿液细胞来源非整合人诱导多能干细胞库的建立 | 第82-85页 |
| 第6章 诱导体系的优化与问题讨论 | 第85-92页 |
| ·诱导体系的进一步优化 | 第85-90页 |
| ·尿液细胞收集培养的优化 | 第85-86页 |
| ·电转条件的优化 | 第86-89页 |
| ·培养基质的优化 | 第89-90页 |
| ·讨论 | 第90-92页 |
| ·建立人诱导多能干细胞库的意义 | 第90页 |
| ·尿液细胞诱导的非整合多能干细胞与尿液细胞转分化的非整合神经干细胞 | 第90-91页 |
| ·小分子诱导人多能干细胞的讨论 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-105页 |
| 附录1 文章中所使用到的缩写词 | 第105页 |
| 附录2 伦理申明 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106-108页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第108页 |
