苹果茎沟病毒的全基因组测序及其侵染性克隆载体的构建
| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-14页 |
| ·引言 | 第11页 |
| ·苹果茎沟病毒病研究现状 | 第11-12页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第12-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-21页 |
| ·材料 | 第14页 |
| ·植物材料 | 第14页 |
| ·菌种和质粒等材料 | 第14页 |
| ·酶和试剂 | 第14页 |
| ·方法 | 第14-21页 |
| ·植物总 RNA 提取方法 | 第14-15页 |
| ·环介导等温扩增方法 | 第15页 |
| ·逆转录方法 | 第15页 |
| ·PCR 扩增方法 | 第15-16页 |
| ·割胶纯化方法 | 第16页 |
| ·连接与转化方法 | 第16页 |
| ·质粒提取方法 | 第16-17页 |
| ·5’与 3’Race 方法 | 第17-19页 |
| ·酶切方法 | 第19页 |
| ·感受态细胞制备方法 | 第19页 |
| ·农杆菌接种方法 | 第19-21页 |
| 第三章 反转录环介导等温扩增 | 第21-26页 |
| ·引物设计 | 第21页 |
| ·RNA 提取与扩增 | 第21-22页 |
| ·体系优化 | 第22页 |
| ·LAMP 的特异性与灵敏度分析 | 第22-25页 |
| ·田间样品的检测 | 第25页 |
| ·结果与分析 | 第25-26页 |
| 第四章 基因组扩增 | 第26-32页 |
| ·引物设计 | 第26-27页 |
| ·RNA 提取与扩增 | 第27页 |
| ·产物纯化与连接转化 | 第27页 |
| ·序列测定 | 第27页 |
| ·序列拼接 | 第27-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-31页 |
| ·基因组全长分析 | 第28-29页 |
| ·CP 基因分析 | 第29-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| 第五章 侵染性克隆载体构建 | 第32-37页 |
| ·载体的选择 | 第32页 |
| ·基因片段拼接 | 第32页 |
| ·片段与载体连接 | 第32-34页 |
| ·酶切位点引物设计 | 第32-33页 |
| ·基因克隆 | 第33页 |
| ·酶切及产物的纯化 | 第33页 |
| ·T4 连接、转化及质粒提取 | 第33-34页 |
| ·质粒转化农杆菌 | 第34页 |
| ·农杆菌接种昆诺藜 | 第34页 |
| ·昆诺藜的培养与检测 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35页 |
| ·昆诺藜的分子检测结果 | 第35页 |
| ·昆诺藜的血清学检测结果 | 第35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 第六章 结论 | 第37-39页 |
| ·结论 | 第37-39页 |
| 参考文献 | 第39-42页 |
| 附录 A：ASGV 中国分离物核苷酸序列 | 第42-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 作者简介 | 第49页 |
| 硕士期间发表论文与获奖情况 | 第49页 |
