| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 符号说明 | 第8-14页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 牛支原体及其牛支原体病的研究进展 | 第15-28页 |
| 1.牛支原体概述 | 第15-28页 |
| ·牛支原体病原学 | 第15-17页 |
| ·M.bovis的分类及形态特征 | 第15-16页 |
| ·M.bovis的生长要求及培养特征 | 第16页 |
| ·M.bovis的抵抗力 | 第16-17页 |
| ·M.bovis致病性 | 第17页 |
| ·牛支原体流行病学 | 第17-18页 |
| ·牛支原体病临床症状与病理变化 | 第18-19页 |
| ·临床症状 | 第18-19页 |
| ·病理变化 | 第19页 |
| ·牛支原体病的诊断技术 | 第19-21页 |
| ·M.bovis分离培养 | 第19-20页 |
| ·M.bovis血清学诊断 | 第20页 |
| ·M.bovis分子生物学诊断 | 第20-21页 |
| ·牛支原体病的治疗与预防技术 | 第21-23页 |
| ·治疗 | 第21-22页 |
| ·预防技术 | 第22-23页 |
| ·牛支原体基因组及其毒力因子研究 | 第23-26页 |
| ·M.bovis基因组 | 第23-24页 |
| ·M.bovis毒力因子 | 第24-26页 |
| ·牛支原体诱导的免疫反应 | 第26-28页 |
| 第二章 试验研究 | 第28-68页 |
| 试验1 牛支原体间接免疫酶标组织化学检测方法的建立 | 第28-41页 |
| 摘要 | 第28-29页 |
| 1 材料 | 第29-30页 |
| ·菌株和病料 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| ·PCR引物合成 | 第29页 |
| ·主要试剂配制 | 第29-30页 |
| 2 方法 | 第30-33页 |
| ·鸡抗牛支原体卵黄抗体的制备 | 第30页 |
| ·鸡抗牛支原体卵黄抗体的提取和纯化 | 第30-31页 |
| ·免疫组化检测牛支原体方法的优化 | 第31-32页 |
| ·最佳一抗的选择 | 第31页 |
| ·组织脱水程序的选择 | 第31页 |
| ·烤片温度及时间的选择 | 第31页 |
| ·过氧化物酶消除时间的选择 | 第31页 |
| ·封闭血清封闭温度的选择 | 第31-32页 |
| ·一抗最佳稀释度及孵育时间的选择 | 第32页 |
| ·二抗最佳稀释度的选择 | 第32页 |
| ·DAB显色时间的选择 | 第32页 |
| ·终止DAB显色的洗涤液的选择 | 第32页 |
| ·苏木素复染时间的选择 | 第32页 |
| ·免疫组化特异性试验 | 第32-33页 |
| ·阳性对照 | 第32页 |
| ·阴性对照 | 第32-33页 |
| ·替代试验 | 第33页 |
| ·病死犊牛病料的检测 | 第33页 |
| ·免疫组化染色结果的判定 | 第33页 |
| 3 结果 | 第33-39页 |
| ·最佳一抗的选择 | 第33页 |
| ·免疫组化法不同条件优化结果 | 第33-34页 |
| ·菌液涂片、组织触片免疫组化优化结果 | 第33-34页 |
| ·组织切片免疫组化优化结果 | 第34页 |
| ·免疫组化方法建立 | 第34页 |
| ·特异性试验 | 第34页 |
| ·病死犊牛病料的检测 | 第34-39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 试验2 牛支原体间接ELISA检测方法的建立 | 第41-54页 |
| 摘要 | 第41页 |
| 1 材料 | 第41-43页 |
| ·菌种和血清 | 第41-42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42页 |
| ·试验溶液配制 | 第42-43页 |
| 2 方法 | 第43-46页 |
| ·牛支原体间接ELISA包被抗原的制备 | 第43页 |
| ·牛支原体菌株扩增与灭活 | 第43页 |
| ·牛支原体培养物离心与裂解 | 第43页 |
| ·阳性和阴性血清的制备 | 第43-44页 |
| ·M.bovis阳性血清来源 | 第43页 |
| ·M.bovis阴性血清的制备 | 第43-44页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第44-46页 |
| ·间接ELISA方法的操作步骤 | 第44页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第44页 |
| ·抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定 | 第44-45页 |
| ·最佳包被方式确定 | 第45页 |
| ·最佳封闭剂和封闭时间的确定 | 第45页 |
| ·一抗最佳作用时间的确定 | 第45页 |
| ·酶标二抗最佳作用时间的确定 | 第45页 |
| ·血清最佳稀释液的确定 | 第45页 |
| ·底物最佳显色时间的确定 | 第45-46页 |
| ·临界值的确定 | 第46页 |
| ·特异性试验 | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-52页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第46页 |
| ·抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定 | 第46-47页 |
| ·最佳包被方式确定 | 第47-48页 |
| ·最佳封闭剂和封闭时间的确定 | 第48页 |
| ·一抗最佳作用时间的确定 | 第48-49页 |
| ·酶标二抗最佳作用时间的确定 | 第49-50页 |
| ·血清最佳稀释液的确定 | 第50页 |
| ·底物最佳显色时间的确定 | 第50-51页 |
| ·临界值的确定 | 第51页 |
| ·特异性试验结果 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 试验3 基于牛支原体P81基因环介导等温扩增方法的建立及与巢式PCR灵敏度的比较 | 第54-68页 |
| 摘要 | 第54-55页 |
| 1 材料 | 第55页 |
| ·菌株与临床标本 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·主要仪器设备 | 第55页 |
| 2 方法 | 第55-59页 |
| ·菌株的培养 | 第55-56页 |
| ·模板的制备 | 第56页 |
| ·临床样品DNA的提取 | 第56页 |
| ·引物的设计与合成 | 第56-57页 |
| ·LAMP反应体系的优化 | 第57-58页 |
| ·LAMP经典反应体系 | 第57页 |
| ·LAMP最佳扩增温度测定 | 第57页 |
| ·LAMP最佳扩增时间测定 | 第57页 |
| ·LAMP最佳内外引物浓度比测定 | 第57页 |
| ·LAMP最佳dNTP浓度测定 | 第57页 |
| ·LAMP最佳甜菜碱浓度测定 | 第57-58页 |
| ·LAMP最佳BstDNA聚合酶用量测定 | 第58页 |
| ·LAMP与巢式PCR灵敏度比较 | 第58页 |
| ·LAMP特异性试验 | 第58页 |
| ·临床样品LAMP检测 | 第58-59页 |
| 3 结果 | 第59-66页 |
| ·LAMP反应体系的优化 | 第59-63页 |
| ·LAMP产物的检测 | 第59-60页 |
| ·LAMP最佳扩增温度测定 | 第60页 |
| ·LAMP最佳扩增时间测定 | 第60-61页 |
| ·LAMP最佳内外引物浓度比测定 | 第61页 |
| ·LAMP最佳dNTP浓度测定 | 第61-62页 |
| ·LAMP最佳甜菜碱浓度测定 | 第62-63页 |
| ·LAMP最佳BstDNA聚合酶用量测定 | 第63页 |
| ·LAMP与巢式PCR灵敏度比较 | 第63-65页 |
| ·LAMP特异性试验 | 第65页 |
| ·临床样品LAMP检测 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 全文结论 | 第68页 |
| 创新点 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简介 | 第77-78页 |
| 导师评阅表 | 第78页 |
