| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-21页 |
| ·甲基营养菌的概述 | 第11-15页 |
| ·单碳化合物及甲醇简介 | 第11页 |
| ·甲基营养菌的定义 | 第11页 |
| ·甲基营养菌的分类 | 第11-12页 |
| ·甲基营养菌的应用 | 第12页 |
| ·甲基营养菌及其代谢途径的研究与进展 | 第12-15页 |
| ·L-丝氨酸概述 | 第15-19页 |
| ·L-丝氨酸的定义 | 第15页 |
| ·L-丝氨酸生产概况 | 第15-17页 |
| ·L-丝氨酸的应用概况 | 第17页 |
| ·甲基营养型菌株生产L-丝氨酸的研究进展 | 第17-19页 |
| ·基因mtaA简介 | 第19页 |
| ·本课题的研究背景 | 第19-20页 |
| ·本课题的研究内容及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-42页 |
| ·本实验所用的菌株及质粒 | 第21页 |
| ·常规的微生物操作 | 第21-24页 |
| ·实验所用的培养基 | 第21-23页 |
| ·菌体的培养与保存 | 第23页 |
| ·菌种的活化 | 第23页 |
| ·实验所用抗生素 | 第23-24页 |
| ·M. sp. MB200 突变体在MMI液体培养基中生长曲线的测定 | 第24页 |
| ·仪器与设备 | 第24-25页 |
| ·分子操作技术 | 第25-36页 |
| ·实验常用缓冲液及溶液 | 第25-26页 |
| ·甲基营养菌MB200 基因组DNA的提取 | 第26页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第26-29页 |
| ·碱变性法提取质粒DNA | 第26-28页 |
| ·试剂盒小量提取质粒DNA | 第28页 |
| ·试剂盒提取低拷贝质粒DNA | 第28-29页 |
| ·DNA的沉淀与贮存 | 第29页 |
| ·DNA分子的限制性酶切及纯化、连接 | 第29-31页 |
| ·限制性内切酶酶切 | 第29-30页 |
| ·DNA产物纯化 | 第30-31页 |
| ·DNA连接反应 | 第31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第31-32页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第32-34页 |
| ·E.coli感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| ·转化 | 第33-34页 |
| ·聚合酶链式反应（PCR） | 第34-35页 |
| ·PCR引物的设计 | 第34页 |
| ·模版的制备 | 第34页 |
| ·PCR反应体系 | 第34-35页 |
| ·PCR反应条件 | 第35页 |
| ·三亲本接合 | 第35-36页 |
| ·M. sp MB200 基因组上目标基因的缺失突变体的构建与互补 | 第36页 |
| ·M. sp.MB200 基因组上目标基因的突变体的构建 | 第36页 |
| ·突变体的回补 | 第36页 |
| ·甲硫腺苷磷酸化酶（MTAP）酶活的测定 | 第36-39页 |
| ·MTAP酶活测定的方法及其原理 | 第36-38页 |
| ·腺嘌呤标准曲线的绘制 | 第37-38页 |
| ·MTAP酶活的测定 | 第38页 |
| ·L-丝氨酸不同浓度下MTAP酶活的测定 | 第38页 |
| ·酶活计算 | 第38-39页 |
| ·M. sp. MB200 突变体耐受L-丝氨酸情况分析 | 第39页 |
| ·菌株产L-丝氨酸静息细胞反应体系制备 | 第39-40页 |
| ·甲基营养菌M . sp. MB200 静息细胞反应体系的制备 | 第39-40页 |
| ·突变体与回补体静息细胞反应体系的制备 | 第40页 |
| ·DNS-氨基酸的聚酰胺薄膜层析 | 第40-41页 |
| ·生物信息学方法 | 第41-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-55页 |
| ·候选基因筛选 | 第42页 |
| ·mtaA的生物信息学分析 | 第42-43页 |
| ·缺失突变体的构建 | 第43-48页 |
| ·PCR扩增mtaA基因旁侧序列片段 | 第44-45页 |
| ·mtaA基因旁侧序列片段克隆到载体pK18mobSacB上 | 第45-47页 |
| ·缺失突变体的筛选和验证 | 第47-48页 |
| ·缺失突变体的功能互补 | 第48-50页 |
| ·互补片段的扩增 | 第49页 |
| ·将互补基因片段克隆到载体pCM80 上 | 第49-50页 |
| ·互补菌株的筛选和验证 | 第50页 |
| ·M. sp. MB200 MTAP酶活的测定 | 第50-51页 |
| ·M. sp. MB200 突变体MTAP酶活的测定 | 第51-52页 |
| ·M. sp. MB200 突变体耐受L-丝氨酸情况分析 | 第52页 |
| ·M. sp. MB200 突变体在MMI培养基中的生长曲线测定 | 第52-53页 |
| ·M. sp. MB200 突变体产L-丝氨酸分析 | 第53-55页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第55-57页 |
| ·总结 | 第55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第66页 |
