| 目录 | 第1-6页 |
| CONTENTS | 第6-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-17页 |
| ·抵抗素的简介 | 第13-14页 |
| ·抵抗素的概述 | 第13页 |
| ·人抵抗素的分子结构特征 | 第13页 |
| ·人抵抗素的表达与分布 | 第13-14页 |
| ·抵抗素与胰岛素抵抗的关系 | 第14页 |
| ·FGF-21的简介 | 第14-16页 |
| ·FGF-21的概述 | 第14-15页 |
| ·FGF-21生物学功能 | 第15-16页 |
| ·FGF-21的安全性 | 第16页 |
| ·研究目的与意义 | 第16-17页 |
| 2 实验材料 | 第17-20页 |
| ·质粒和细胞株 | 第17页 |
| ·培养基及试剂 | 第17页 |
| ·Overlap PCR引物 | 第17-18页 |
| ·Real-time PCR引物及试剂盒 | 第18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18-20页 |
| 3 方法 | 第20-34页 |
| ·Resistin基因定点突变 | 第20-24页 |
| ·Resistin基因A段PCR扩增及胶回收 | 第20-21页 |
| ·Resistin基因B段PCR扩增及胶回收 | 第21页 |
| ·Resistin基因Overlap PCR扩增及胶回收 | 第21-22页 |
| ·Resistin Overlap PCR纯化产物与T载体的连接 | 第22页 |
| ·大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第22页 |
| ·连接产物的转化及质粒提取 | 第22-23页 |
| ·阳性重组质粒的鉴定 | 第23页 |
| ·Resistin基因定点突变后的序列测定及分析 | 第23-24页 |
| ·Resistin真核表达载体的构建 | 第24-27页 |
| ·Peedual-Resistin真核表达载体设计方案 | 第24-25页 |
| ·Pkappa-Resistin重组质粒的构建及鉴定 | 第25页 |
| ·Pee12.4-Resistin重组载体的构建及鉴定 | 第25-26页 |
| ·Peedual-Resistin真核表达载体的构建及鉴定 | 第26-27页 |
| ·peedual对照载体构建及鉴定 | 第27页 |
| ·去内毒素的质粒提取及浓度测定 | 第27页 |
| ·过表达抵抗素模型细胞的建立 | 第27-31页 |
| ·HepG2细胞培养 | 第27-28页 |
| ·细胞转染 | 第28页 |
| ·阳性细胞的筛选 | 第28-29页 |
| ·过表达抵抗素细胞系HepG2-R的鉴定 | 第29-31页 |
| ·过表达抵抗素细胞系HepG2-R糖代谢的研究 | 第31-34页 |
| ·MTT法检测Resistin基因转染对HepG2细胞增殖活力的影响 | 第31页 |
| ·过表达抵抗素细胞系HepG2-R基础糖吸收的检测 | 第31页 |
| ·过表达抵抗素细胞系HepG2-R对胰岛素敏感性的检测 | 第31-32页 |
| ·FGF-21对过表达抵抗素细胞系HepG2-R糖吸收的影响 | 第32页 |
| ·Resistin基因转染对HepG2细胞GLUT1、PPAR-γ表达的影响 | 第32页 |
| ·FGF-21对HepG2-R的GLUT1、PPAR-γ表达的影响 | 第32-33页 |
| ·Resistin基因转染对HepG2细胞糖原合成的影响 | 第33页 |
| ·FGF-21对HepG2-R糖原合成的影响 | 第33-34页 |
| 4 实验结果 | 第34-53页 |
| ·Resistin基因定点点突变 | 第34-36页 |
| ·Resistin基因A段PCR扩增及纯化 | 第34页 |
| ·Resistin基因B段PCR扩增及纯化 | 第34-35页 |
| ·Resistin基因Overlap PCR扩增及纯化 | 第35-36页 |
| ·pMD18-T-Resistin重组质粒的构建及鉴定 | 第36页 |
| ·Resistin真核表达载体的构建 | 第36-40页 |
| ·Pkappa-Resistin质粒的构建及鉴定 | 第36-37页 |
| ·Pee12.4-Resistin重组载体的构建及鉴定 | 第37-38页 |
| ·Peedual-Resistin真核表达载体的构建及鉴定 | 第38-40页 |
| ·peedual对照载体构建 | 第40页 |
| ·去内毒素的质粒提取及浓度测定 | 第40页 |
| ·过表达抵抗素细胞系HepG2-R建立 | 第40-44页 |
| ·细胞转染 | 第40-41页 |
| ·阳性细胞的筛选 | 第41-43页 |
| ·过表达抵抗素细胞系HepG2-R的鉴定 | 第43-44页 |
| ·FGF-21对过表达抵抗素细胞系HepG2-R糖代谢作用的研究 | 第44-53页 |
| ·MTT法检测转染对HepG2细胞增殖的影响 | 第44-45页 |
| ·过表达抵抗素细胞系HepG2-R基础糖吸收的检测 | 第45页 |
| ·过表达抵抗素细胞系HepG2-R对胰岛素敏感性的检测 | 第45-46页 |
| ·FGF-21对模型细胞糖吸收的影响 | 第46-47页 |
| ·Resistin基因转染对HepG2细胞GLUT1、PPAR-γ表达的影响 | 第47-49页 |
| ·FGF-21对模型细胞GLUT1、PPAR-γ表达的影响 | 第49-50页 |
| ·Resistin基因转染对HepG2细胞糖原合成的影响 | 第50-51页 |
| ·FGF-21对过表达抵抗素模型细胞糖原合成的影响 | 第51-53页 |
| 5 讨论 | 第53-56页 |
| ·过表达抵抗素引发胰岛素抵抗模型细胞的建立 | 第53-54页 |
| ·FGF-21有效调节模型细胞的葡萄糖消耗 | 第54页 |
| ·Resistin基因转染对HepG2细胞GLUT1、PPAR-γ表达的影响 | 第54-55页 |
| ·FGF-21对模型细胞GLUT1、PPAR-γ表达的影响 | 第55页 |
| ·FGF-21调节模型细胞的糖原合成 | 第55-56页 |
| 6 结论 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第62页 |
