| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-21页 |
| ·D-乳酸的理化性质、应用及市场份额 | 第10-12页 |
| ·乳酸的理化性质 | 第10-11页 |
| ·D-乳酸的应用 | 第11页 |
| ·D-乳酸在手性前体物合成中的应用 | 第11页 |
| ·D-乳酸在生物材料聚乳酸（PLA）中的应用 | 第11页 |
| ·D-乳酸的市场份额和商业生产 | 第11-12页 |
| ·D-乳酸的工业生产方法 | 第12-14页 |
| ·化学合成法 | 第12页 |
| ·微生物发酵法 | 第12-14页 |
| ·同型乳酸发酵 | 第12-13页 |
| ·异型乳酸发酵 | 第13页 |
| ·混合酸发酵 | 第13-14页 |
| ·D-乳酸工程菌发酵的研究进展 | 第14-19页 |
| ·D-乳酸工程菌的构建及发酵工艺 | 第14-18页 |
| ·D-型乳酸杆菌的研究进展 | 第14-15页 |
| ·D-型乳酸芽孢乳杆菌的研究进展 | 第15-16页 |
| ·非传统乳酸菌构建 D-乳酸基因工程菌的研究进展 | 第16-18页 |
| ·发酵原料的选择 | 第18-19页 |
| ·本论文研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| ·本论文的研究内容 | 第20-21页 |
| 第2章 RED 重组技术构建 D-乳酸大肠杆菌工程菌 | 第21-40页 |
| ·实验材料 | 第21-25页 |
| ·菌株及质粒 | 第21页 |
| ·实验试剂 | 第21-22页 |
| ·实验溶液 | 第22-23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·实验所需引物 | 第24页 |
| ·实验仪器 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-31页 |
| ·出发菌株的保存及活化 | 第25页 |
| ·将 pKD46 转化入出发菌株 | 第25-26页 |
| ·质粒 pkd46 的提取 | 第25页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·CaCl2法转化大肠杆菌 HBUT-D1 感受态细胞 | 第26页 |
| ·同源重组片段的扩增 | 第26-27页 |
| ·PCR 扩增反应条件 | 第26-27页 |
| ·扩增片段的电泳检测 | 第27页 |
| ·扩增片段的纯化 | 第27页 |
| ·制备电击感受态细胞及同源重组片段电击转化 | 第27-28页 |
| ·转化子的筛选与验证 | 第28页 |
| ·卡那霉素抗性基因的消除 | 第28-29页 |
| ·无氧生长进化筛选 | 第29页 |
| ·敲除后工程菌发酵性能评估 | 第29-31页 |
| ·无氧管发酵 | 第29页 |
| ·发酵产物分析 | 第29-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-39页 |
| ·构建同型乳酸发酵途径 | 第31-33页 |
| ·质粒 pKD46 的转化 | 第33-34页 |
| ·PCR 扩增带 FRT 位点的抗性基因 | 第34-36页 |
| ·敲除蔗糖启动子抑制基因（cscR）的 PCR 验证 | 第36-37页 |
| ·消除卡那霉素基因（kan）位点的 PCR 验证 | 第37-38页 |
| ·敲除后工程菌无氧发酵性能评估 | 第38-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 第3章 大肠杆菌工程菌 HBUT-D 在不同碳源下产乳酸的研究 | 第40-51页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·实验试剂 | 第40页 |
| ·培养基 | 第40页 |
| ·试验仪器及设备 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-41页 |
| ·摇瓶发酵最适 CaCO_3添加浓度的确定 | 第40-41页 |
| ·利用不同碳源摇瓶发酵的初步研究 | 第41页 |
| ·利用不同碳源 7 L 发酵罐发酵的研究 | 第41页 |
| ·利用不同碳源 15L 发酵罐发酵的研究 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-50页 |
| ·CaCO_3浓度对摇瓶发酵 D-乳酸的影响 | 第41-42页 |
| ·利用葡萄糖、蔗糖、蔗糖糖蜜摇瓶发酵的初步研究 | 第42-43页 |
| ·7 L 发酵罐发酵产 D-乳酸结果 | 第43-47页 |
| ·工程菌 HBUT-D 与野生菌 W 葡萄糖发酵对比 | 第43-44页 |
| ·工程菌 HBUT-D 与野生菌 W 蔗糖发酵对比 | 第44-45页 |
| ·工程菌 HBUT-D 废糖水发酵结果 | 第45-46页 |
| ·工程菌 HBUT-D 蔗糖糖蜜发酵结果 | 第46-47页 |
| ·15 L 发酵罐发酵产 D-乳酸结果 | 第47-49页 |
| ·HBUT-D 与 W 菌葡萄糖发酵对比 | 第47-48页 |
| ·HBUT-D 蔗糖发酵结果 | 第48-49页 |
| ·D-乳酸光学纯度 | 第49页 |
| ·7 L 发酵罐与 15 L 发酵罐发酵结果比较分析 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第4章 大肠杆菌工程菌 HBUT-D 发酵条件的研究 | 第51-58页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·培养基 | 第51页 |
| ·实验药品及试剂 | 第51页 |
| ·实验仪器与设备 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-53页 |
| ·种子的制备及 D-乳酸发酵 | 第51-52页 |
| ·发酵液生物量及发酵产物的测定 | 第52页 |
| ·发酵液生物量的测定 | 第52页 |
| ·发酵液中 D-乳酸的测定 | 第52页 |
| ·发酵液中蔗糖的测定 | 第52页 |
| ·发酵条件对 D-乳酸产量的影响 | 第52-53页 |
| ·接种量对 D-乳酸发酵的影响 | 第52页 |
| ·糖浓度对 D-乳酸发酵的影响 | 第52页 |
| ·甜菜碱的添加与否对 D-乳酸发酵的影响 | 第52页 |
| ·温度对 D-乳酸发酵的影响 | 第52-53页 |
| ·装液量对 D-乳酸发酵的影响 | 第53页 |
| ·转速对 D-乳酸发酵的影响 | 第53页 |
| ·结果与分析 | 第53-57页 |
| ·接种量对 D-乳酸发酵的影响 | 第53-54页 |
| ·初始糖浓度对 D-乳酸发酵的影响 | 第54页 |
| ·有无添加甜菜碱的影响 | 第54-55页 |
| ·温度对 D-乳酸发酵的影响 | 第55-56页 |
| ·装液量对 D-乳酸发酵的影响 | 第56页 |
| ·转速对 D-乳酸发酵的影响 | 第56-57页 |
| ·结论 | 第57-58页 |
| 第5章 总结与展望 | 第58-60页 |
| ·结论 | 第58-59页 |
| ·特色与特点 | 第59页 |
| ·展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 附录 | 第65页 |
