| 学位论文数据集 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第16-26页 |
| 1.1 苹果酸简介 | 第16-17页 |
| 1.1.1 苹果酸理化性质及其应用 | 第16页 |
| 1.1.2 苹果酸的生产方法与现状 | 第16-17页 |
| 1.2 苹果酸合成的相关研究进展 | 第17-22页 |
| 1.2.1 酶转化法及细胞转化法研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2.1.1 酶转化法研究 | 第17-18页 |
| 1.2.1.2 细胞转化法合成苹果酸研究 | 第18页 |
| 1.2.2 高产苹果酸菌株的选育 | 第18-22页 |
| 1.2.2.1 细菌 | 第18-19页 |
| 1.2.2.2 酵母 | 第19-20页 |
| 1.2.2.3 霉菌 | 第20-21页 |
| 1.2.2.4 其他真菌 | 第21页 |
| 1.2.2.5 其他苹果酸相关研究 | 第21页 |
| 1.2.2.6 酶的改造与研究 | 第21-22页 |
| 1.3 木糖发酵合成产物利用进展 | 第22页 |
| 1.4 木糖发酵合成苹果酸途径 | 第22-23页 |
| 1.5 选题的背景与意义 | 第23-26页 |
| 第二章 苹果酸生产菌株的构建及培养 | 第26-42页 |
| 2.1 前言 | 第26页 |
| 2.2 材料与方法 | 第26-29页 |
| 2.2.1 质粒和菌株 | 第26-27页 |
| 2.2.2 材料和仪器 | 第27页 |
| 2.2.3 常用培养基与抗生素配置 | 第27页 |
| 2.2.4 常用分子生物学试剂及来源 | 第27页 |
| 2.2.5 基础操作方法 | 第27-29页 |
| 2.2.5.1 无菌操作 | 第28页 |
| 2.2.5.2 灭菌 | 第28页 |
| 2.2.5.3 摇瓶发酵及取样 | 第28-29页 |
| 2.2.5.4 吸光度测定 | 第29页 |
| 2.2.5.5 液相 | 第29页 |
| 2.2.6 分子生物学实验方法 | 第29页 |
| 2.3 苹果酸合成突变体构建 | 第29-37页 |
| 2.3.1 maeA基因缺失突变体E.coli △MA1的构建 | 第30-33页 |
| 2.3.2 maeA和maeB基因缺失突变体E.coli △MA2的构建 | 第33-34页 |
| 2.3.3 maeA、maeB和mdh基因缺失突变体E.coli △MA3的构建 | 第34-35页 |
| 2.3.4 maeA、maeB、mdh和fumAC基因缺失突变体E.coli △MA4的构建 | 第35-36页 |
| 2.3.5 maeA、maeB、mdh、fumAC和fumB基因缺失突变体E.coli △MA5的构建 | 第36-37页 |
| 2.4 苹果酸生产菌的构建和培养 | 第37-40页 |
| 2.4.1 苹果酸生产菌株的构建 | 第37页 |
| 2.4.2 苹果酸生产菌株的培养 | 第37页 |
| 2.4.3 液相标准曲线的测定 | 第37-38页 |
| 2.4.4 苹果酸生产菌株的培养结果与分析 | 第38-40页 |
| 2.5 本章小结 | 第40-42页 |
| 第三章 内源相关基因过表达对苹果酸合成的影响 | 第42-64页 |
| 3.1 前言 | 第42页 |
| 3.2 实验材料和实验方法 | 第42-43页 |
| 3.2.1 实验用到的菌株、质粒、材料以及仪器 | 第42-43页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第43页 |
| 3.3 质粒构建 | 第43-57页 |
| 3.3.1 细菌基因组提取 | 第44页 |
| 3.3.2 基因片段的获得 | 第44-46页 |
| 3.3.3 各质粒的构建方法和构建结果 | 第46-57页 |
| 3.3.3.1 pEn-aceB质粒构建 | 第46-48页 |
| 3.3.3.2 pEn-glcB质粒构建 | 第48-50页 |
| 3.3.3.3 pEn-glcDEF质粒构建 | 第50-51页 |
| 3.3.3.4 质粒pEn-glcB-aceB构建 | 第51-53页 |
| 3.3.3.5 质粒pEn-glcDEF- aceB构建 | 第53-55页 |
| 3.3.3.6 质粒pEn-glcDEF-glcB构建 | 第55-56页 |
| 3.3.3.7 质粒pEn-glcDEF-glcB-aceB构建 | 第56-57页 |
| 3.4 苹果酸合成相关基因过表达菌株构建及培养 | 第57-61页 |
| 3.4.1 野生型菌株glcDEF、glcB和aceB基因过表达的影响 | 第57页 |
| 3.4.2 E.coli △MA5中过表达不同基因的影响 | 第57-61页 |
| 3.5 L-苹果酸合成途径验证 | 第61-62页 |
| 3.6 本章小结 | 第62-64页 |
| 第四章 细胞内H_2O_2和NADH含量对苹果酸合成的影响 | 第64-76页 |
| 4.1 前言 | 第64页 |
| 4.2 实验材料和实验方法 | 第64-65页 |
| 4.2.1 实验用到的菌株、质粒、引物和材料 | 第64-65页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第65页 |
| 4.3 质粒构建 | 第65-72页 |
| 4.3.1 目的基因的获取 | 第65-66页 |
| 4.3.2 质粒pEn-glcB-noxE的构建 | 第66-68页 |
| 4.3.3 质粒pEn-glcDEF-glcB-noxE的构建 | 第68-69页 |
| 4.3.4 质粒pEn-glcDEF-glcB-katE构建 | 第69-72页 |
| 4.4 katE过表达和noxE表达菌株构建及培养 | 第72页 |
| 4.5 katE过表达和noxE表达的影响 | 第72-74页 |
| 4.6 本章小结 | 第74-76页 |
| 第五章 结论、创新点及展望 | 第76-78页 |
| 5.1 结论 | 第76-77页 |
| 5.2 创新点 | 第77页 |
| 5.3 展望 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-82页 |
| 附录 | 第82-94页 |
| 致谢 | 第94-96页 |
| 研究成果及发表论文 | 第96-98页 |
| 作者与导师简介 | 第98-100页 |
| 硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第100-101页 |
