| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 前言 | 第11-17页 |
| ·肝癌简介 | 第11页 |
| ·microRNA简介 | 第11-14页 |
| ·mcroRNA的发现 | 第12页 |
| ·microRNA的加工过程 | 第12页 |
| ·microRNA的功能机制 | 第12页 |
| ·microRNA的特征 | 第12-13页 |
| ·microRNA与肿瘤 | 第13页 |
| ·mcroRNA 370 | 第13-14页 |
| ·RNA结合蛋白LIN28 | 第14-16页 |
| ·RNA结合蛋白 | 第14页 |
| ·LIN28 | 第14-15页 |
| ·microRNA与LIN28A、LIN28B | 第15-16页 |
| ·LIN28与干细胞和肿瘤 | 第16页 |
| ·研究目的和内容 | 第16-17页 |
| ·研究目的 | 第16页 |
| ·研究内容 | 第16-17页 |
| 第2章 材料与方法 | 第17-38页 |
| ·试验材料及试剂 | 第17-21页 |
| ·试验仪器 | 第17-18页 |
| ·菌株以及培养基 | 第18页 |
| ·表达载体 | 第18页 |
| ·生化试剂 | 第18-19页 |
| ·实时荧光定量PCR引物 | 第19-20页 |
| ·RNA干扰序列 | 第20页 |
| ·microRNA和microRNA inhibitor序列 | 第20页 |
| ·构建psiCHECK~(TM)-2序列所用的引物序列 | 第20-21页 |
| ·实验方法与步骤 | 第21-38页 |
| ·microRNA的提取 | 第21-22页 |
| ·RNA逆转录 | 第22页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第22-23页 |
| ·miR-370片段重组质粒的构建 | 第23-26页 |
| ·细胞培养 | 第26-28页 |
| ·细胞转染实验 | 第28-29页 |
| ·细胞平板克隆形成实验 | 第29页 |
| ·细胞软琼脂克隆形成实验(24孔板) | 第29-30页 |
| ·细胞生长曲线测定实验(96孔板) | 第30页 |
| ·psiCHECK~(TM)-2-LIN28荧光素酶报告基因质粒的构建 | 第30-32页 |
| ·荧光素酶报告基因检测 | 第32页 |
| ·蛋白印迹(Western Blot) | 第32-34页 |
| ·表达miR-370的腺病毒载体构建、包装及扩增 | 第34-38页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第38-65页 |
| ·在多种肝癌细胞系及正常肝组织中miR-370的内源表达情况 | 第38-40页 |
| ·改进的TRIzol方法提取microRNA | 第38页 |
| ·miR-370在十株人肝癌细胞株及五种正常肝组织中的内源表达 | 第38-40页 |
| ·miR-370在肝癌及癌旁组织中的表达 | 第40页 |
| ·miR-370与肝肿瘤细胞增殖能力的关系 | 第40-43页 |
| ·过表达miR-370对肝癌细胞株MHCC-H和PLC增殖能力的影响 | 第41-42页 |
| ·过表达miR-370对肝癌细胞株Hep3B和HepG2增殖能力的影响 | 第42-43页 |
| ·miR-370 inhibitor对肝肿瘤细胞增殖能力的影响 | 第43-44页 |
| ·过表达miR-370对肝癌细胞克隆形成能力的影响 | 第44-51页 |
| ·构建真核表达载体pcDNA370 | 第45-46页 |
| ·过表达miR-370对肝肿瘤细胞平板克隆形成能力的影响 | 第46-50页 |
| ·过表达miR-370对肝肿瘤细胞定着非依赖性生长的影响 | 第50-51页 |
| ·miR-370的靶基因研究 | 第51-56页 |
| ·LIN28A与miR-370 | 第52-53页 |
| ·psiCHECK~(TM)-2载体与作用流程图 | 第53-54页 |
| ·构建psiCHECK~(TM)-2-LIN28荧光素酶报告基因质粒 | 第54-55页 |
| ·LIN28荧光素酶报告基因实验 | 第55-56页 |
| ·过表达miR-370抑制了内源LIN28的表达 | 第56-57页 |
| ·miR-370的过表达在RNA水平上对LIN28的影响 | 第56-57页 |
| ·LIN28表达下调对肝癌细胞株的影响 | 第57-59页 |
| ·miR-370影响干细胞相关基因表达 | 第59-60页 |
| ·Ad-miR-370对肝肿瘤细胞的影响 | 第60-63页 |
| ·构建腺病毒Ad-miR-370 | 第60-63页 |
| ·Ad-miR-370对肝肿瘤细胞生长的影响 | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
