| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| ·1,3-丙二醇概述 | 第13-14页 |
| ·1,3-丙二醇的基本性质 | 第13页 |
| ·1,3-丙二醇的主要用途 | 第13-14页 |
| ·1,3-丙二醇的生产概况 | 第14页 |
| ·生物法合成1,3-丙二醇的研究进展 | 第14-18页 |
| ·生物合成1,3-丙二醇的菌种和生产能力 | 第14页 |
| ·生物合成1,3-丙二醇的代谢途径 | 第14-17页 |
| ·生物合成1,3-丙二醇的基因工程生产情况 | 第17-18页 |
| ·生物法合成1,3-丙二醇关键酶－甘油脱水酶的研究进展 | 第18-21页 |
| ·甘油脱水酶的结构和性质 | 第18-19页 |
| ·甘油脱水酶的催化机理 | 第19页 |
| ·甘油脱水酶的失活研究情况 | 第19-20页 |
| ·甘油脱水酶的克隆表达研究情况 | 第20-21页 |
| ·甘油脱水酶复活因子的研究进展 | 第21-24页 |
| ·甘油脱水酶复活因子的结构与性质 | 第21-22页 |
| ·甘油脱水酶复活因子的复活机理 | 第22-23页 |
| ·甘油脱水酶复活因子的克隆表达研究情况 | 第23-24页 |
| ·论文的研究意义和技术框架 | 第24-25页 |
| ·论文研究的意义 | 第24页 |
| ·技术路线 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-34页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·土壤样品来源 | 第25页 |
| ·菌种和质粒 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·实验仪器 | 第26页 |
| ·实验试剂 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-30页 |
| ·产1,3-丙二醇菌种的筛选方法 | 第27-28页 |
| ·菌株鉴定方法 | 第28页 |
| ·主要基因操作方法 | 第28-30页 |
| ·细菌总DNA 的提取 | 第28页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第28页 |
| ·PCR产物的回收方法 | 第28-29页 |
| ·PCR产物与克隆载体的连接 | 第29页 |
| ·热击用大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·DNA的酶切与连接 | 第29页 |
| ·连接产物对大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第29-30页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第30页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第30页 |
| ·蛋白质的SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第30页 |
| ·分析方法 | 第30-34页 |
| ·菌体生物量的测定 | 第30页 |
| ·代谢产物的高效液相色谱分析 | 第30-32页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第32页 |
| ·丙醛浓度的测定 | 第32-33页 |
| ·甘油脱水酶活性的测定 | 第33页 |
| ·甘油脱水酶复活因子活性的测定 | 第33-34页 |
| 第三章 产1,3-丙二醇菌株的筛选、鉴定和发酵特性 | 第34-45页 |
| ·1,3-丙二醇产生菌株的筛选 | 第34-35页 |
| ·菌株筛选方法的建立 | 第34页 |
| ·目标菌株的筛选 | 第34-35页 |
| ·1,3-丙二醇产生菌株的鉴定 | 第35-38页 |
| ·菌株形态观察 | 第35-36页 |
| ·1651DNA 核酸特征分析 | 第36-37页 |
| ·菌株生理生化特征分析 | 第37-38页 |
| ·K.pneumoniae XJPD-Li 菌发酵特性 | 第38-42页 |
| ·K.pneumoniae XJPD-Li 菌生长与产物形成关系 | 第38页 |
| ·培养温度对菌体生长和1,3-PD 合成的影响 | 第38-39页 |
| ·初始pH 对菌体生长和1,3-PD 合成的影响 | 第39-40页 |
| ·氮源对菌体生长和1,3-PD 合成的影响 | 第40页 |
| ·初始甘油浓度对菌体生长和1,3-PD 合成的影响 | 第40-41页 |
| ·辅助碳源对菌体生长和1,3-PD 合成的影响 | 第41-42页 |
| ·K.pneumoniae XJPD-Li 批式和补料批式发酵研究 | 第42-44页 |
| ·K.pneumoniae XJPD-Li批式发酵 | 第42-43页 |
| ·K.pneumoniae XJPD-Li补料批式发酵 | 第43-44页 |
| 小结 | 第44-45页 |
| 第四章K.pneumoniae XJPD-Li甘油脱水酶的催化反应特性 | 第45-52页 |
| ·甘油脱水酶活性与菌体生长关系 | 第45页 |
| ·温度对甘油脱水酶活性的影响 | 第45-47页 |
| ·最适反应温度 | 第45-47页 |
| ·热稳定性 | 第47页 |
| ·pH 对甘油脱水酶活性的影响 | 第47-49页 |
| ·最适反应pH | 第47-48页 |
| ·pH稳定性 | 第48-49页 |
| ·金属离子对甘油脱水酶活性的影响 | 第49页 |
| ·底物浓度对甘油脱水酶活性的影响 | 第49-51页 |
| ·甘油对甘油脱水酶活性的影响及动力学参数 | 第49-50页 |
| ·1,2-丙二醇对甘油脱水酶活性的影响及动力学参数 | 第50-51页 |
| 小结 | 第51-52页 |
| 第五章K.pneumoniae XJPD-Li甘油脱水酶的克隆与表达 | 第52-59页 |
| ·甘油脱水酶基因的克隆、鉴定和序列分析 | 第52-55页 |
| ·甘油脱水酶dhaBCE 基因的扩增 | 第53-54页 |
| ·甘油脱水酶dhaBCE 基因的克隆与鉴定 | 第54-55页 |
| ·甘油脱水酶表达质粒PET-28a(+)-dhaBCE 的构建 | 第55-57页 |
| ·重组质粒PET-28a(+)-dhaBCE 在E.coli BL21（DE3）中的诱导表达 | 第57-58页 |
| 小结 | 第58-59页 |
| 第六章K.pneumoniae XJPD-Li甘油脱水酶复活因子的克隆与表达 | 第59-68页 |
| ·甘油脱水酶复活因子α亚基基因的克隆、鉴定和序列分析 | 第59-62页 |
| ·甘油脱水酶复活因子α亚基dhaF 基因的扩增 | 第59-60页 |
| ·甘油脱水酶复活因子α亚基dhaF 基因的克隆与鉴定 | 第60-62页 |
| ·甘油脱水酶复活因子β亚基基因的克隆、鉴定和序列分析 | 第62-64页 |
| ·甘油脱水酶复活因子β亚基dhaG 基因的扩增 | 第62-63页 |
| ·甘油脱水酶复活因子β亚基dhaG 基因的克隆与鉴定 | 第63-64页 |
| ·甘油脱水酶复活因子表达质粒PET-28a(+)-dhaFG 的构建 | 第64-66页 |
| ·重组质粒PET-28a(+)-dhaFG 在E.coli BL21（DE3）中的诱导表达 | 第66-67页 |
| 小结 | 第67-68页 |
| 第七章 甘油脱水酶的催化失活与复活动力学 | 第68-75页 |
| ·甘油脱水酶的催化失活动力学 | 第68-69页 |
| ·定量研究失活甘油脱水酶的复活效果 | 第69-72页 |
| ·辅酶B_(12) 对失活甘油脱水酶复活的影响 | 第69页 |
| ·ATP 对失活甘油脱水酶复活的影响 | 第69-70页 |
| ·Mg~(2+)对失活甘油脱水酶复活的影响 | 第70-71页 |
| ·甘油脱水酶与复活因子质量比对失活甘油脱水酶复活的影响 | 第71页 |
| ·正交实验优化各因素对失活甘油脱水酶的复活效果 | 第71-72页 |
| ·各因素对失活甘油脱水酶复活的贡献程度 | 第72-73页 |
| ·甘油脱水酶的复活动力学 | 第73-74页 |
| 小结 | 第74-75页 |
| 第八章 结论与展望 | 第75-77页 |
| ·结论 | 第75-76页 |
| ·展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 附录 | 第83-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 作者简介 | 第90-92页 |
| 导师评阅表 | 第92页 |
