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sCT和OGP的融合表达及活性试验

中文摘要第1-6页
英文摘要第6-7页
第一部分 综述第7-18页
 1 骨的代谢和骨质疏松症第7-9页
 2 降钙素第9-11页
  2.1 降钙素的结构及功能第9-11页
  2.2 降钙素的应用第11页
 3 骨生长肽第11-14页
  3.1 骨生长肽的结构及功能第11-13页
  3.2 骨生长肽的应用第13-14页
 4 其它相关因子第14-18页
  4.1 甲状旁腺激素第14-15页
  4.2 活性维生素D第15-16页
  4.3 雌激素第16-18页
第二部分 材料和方法第18-31页
 1 实验材料第18-20页
  1.1 菌株及质粒第18页
  1.2 细胞株系及实验动物第18页
  1.3 酶及试剂盒第18-19页
  1.4 培养基第19页
  1.5 其它试剂第19页
  1.6 仪器第19-20页
 2 培养基及缓冲液的配制第20-22页
  2.1 细胞培养基第20页
  2.2 酵母培养基第20-22页
  2.3 其它缓冲液第22页
 3 实验方法第22-31页
  3.1 融合基因的克隆及融合蛋白的表达纯化第22-27页
   3.1.1 DNA片断的合成第22-23页
   3.1.2 DNA的限制性酶切第23页
   3.1.3 DNA片段的连接第23页
   3.1.4 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化第23页
   3.1.5 从溶液中回收重组片断第23-24页
   3.1.6 从胶中回收重组片断第24页
   3.1.7 毕赤酵母感受态细胞的制备及转化第24-25页
   3.1.8 融合蛋白的分泌表达第25页
   3.1.9 Tris-Tricine SDS—PAGE蛋白电泳第25-26页
   3.1.10 融合蛋白的纯化第26页
   3.1.11 融合蛋白的序列分析第26页
   3.1.12 融合蛋白浓度的测定第26-27页
  3.2 融合蛋白体外活性试验第27-29页
   3.2.1 成纤维细胞的培养及传代第27页
   3.2.2 成骨细胞的原代培养第27页
   3.2.3 成骨细胞的传代第27-28页
   3.2.4 成骨细胞的鉴定第28页
   3.2.5 血球计数板计数第28页
   3.2.6 MTT细胞增殖检测第28-29页
  3.3 融合蛋白体内活性试验第29-31页
   3.3.1 动物试验设计第29页
   3.3.2 血清钙检测第29页
   3.3.3 成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性检测第29-30页
   3.3.4 血清中ALP水平的测定第30-31页
第三部分 结果与讨论第31-46页
 1 融合基因的克隆及融合蛋白的表达与纯化第31-37页
  1.1 目的片断的合成第31-32页
  1.2 重组质粒的鉴定第32-34页
  1.3 毕氏酵母表达菌株的筛选第34-35页
  1.4 融合蛋白的纯化第35-36页
  1.5 融合蛋白的序列分析第36页
  1.6 融合蛋白的浓度测定第36-37页
 2 融合蛋白体外活性试验第37-42页
  2.1 融合蛋白对成纤维细胞增殖的刺激作用第37-39页
  2.2 成骨细胞的鉴定第39-41页
  2.3 成骨细胞爬片实验第41页
  2.4 目的蛋白对成骨细胞的作用第41-42页
 3 融合蛋白体内活性试验第42-46页
  3.1 血清钙水平检测第43-44页
  3.2 清ALP水平检测第44-46页
总结第46-47页
参考文献第47-49页
附录第49-50页
 1 质粒p~(PIC9)图谱第49页
 2 发表文章第49-50页
致谢第50页

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