| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-7页 |
| 第一部分 综述 | 第7-18页 |
| 1 骨的代谢和骨质疏松症 | 第7-9页 |
| 2 降钙素 | 第9-11页 |
| 2．1 降钙素的结构及功能 | 第9-11页 |
| 2．2 降钙素的应用 | 第11页 |
| 3 骨生长肽 | 第11-14页 |
| 3．1 骨生长肽的结构及功能 | 第11-13页 |
| 3．2 骨生长肽的应用 | 第13-14页 |
| 4 其它相关因子 | 第14-18页 |
| 4．1 甲状旁腺激素 | 第14-15页 |
| 4．2 活性维生素D | 第15-16页 |
| 4．3 雌激素 | 第16-18页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第18-31页 |
| 1 实验材料 | 第18-20页 |
| 1．1 菌株及质粒 | 第18页 |
| 1．2 细胞株系及实验动物 | 第18页 |
| 1．3 酶及试剂盒 | 第18-19页 |
| 1．4 培养基 | 第19页 |
| 1．5 其它试剂 | 第19页 |
| 1．6 仪器 | 第19-20页 |
| 2 培养基及缓冲液的配制 | 第20-22页 |
| 2．1 细胞培养基 | 第20页 |
| 2．2 酵母培养基 | 第20-22页 |
| 2．3 其它缓冲液 | 第22页 |
| 3 实验方法 | 第22-31页 |
| 3．1 融合基因的克隆及融合蛋白的表达纯化 | 第22-27页 |
| 3．1．1 DNA片断的合成 | 第22-23页 |
| 3．1．2 DNA的限制性酶切 | 第23页 |
| 3．1．3 DNA片段的连接 | 第23页 |
| 3．1．4 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第23页 |
| 3．1．5 从溶液中回收重组片断 | 第23-24页 |
| 3．1．6 从胶中回收重组片断 | 第24页 |
| 3．1．7 毕赤酵母感受态细胞的制备及转化 | 第24-25页 |
| 3．1．8 融合蛋白的分泌表达 | 第25页 |
| 3．1．9 Tris-Tricine SDS—PAGE蛋白电泳 | 第25-26页 |
| 3．1．10 融合蛋白的纯化 | 第26页 |
| 3．1．11 融合蛋白的序列分析 | 第26页 |
| 3．1．12 融合蛋白浓度的测定 | 第26-27页 |
| 3．2 融合蛋白体外活性试验 | 第27-29页 |
| 3．2．1 成纤维细胞的培养及传代 | 第27页 |
| 3．2．2 成骨细胞的原代培养 | 第27页 |
| 3．2．3 成骨细胞的传代 | 第27-28页 |
| 3．2．4 成骨细胞的鉴定 | 第28页 |
| 3．2．5 血球计数板计数 | 第28页 |
| 3．2．6 MTT细胞增殖检测 | 第28-29页 |
| 3．3 融合蛋白体内活性试验 | 第29-31页 |
| 3．3．1 动物试验设计 | 第29页 |
| 3．3．2 血清钙检测 | 第29页 |
| 3．3．3 成骨细胞碱性磷酸酶（ALP）活性检测 | 第29-30页 |
| 3．3．4 血清中ALP水平的测定 | 第30-31页 |
| 第三部分 结果与讨论 | 第31-46页 |
| 1 融合基因的克隆及融合蛋白的表达与纯化 | 第31-37页 |
| 1．1 目的片断的合成 | 第31-32页 |
| 1．2 重组质粒的鉴定 | 第32-34页 |
| 1．3 毕氏酵母表达菌株的筛选 | 第34-35页 |
| 1．4 融合蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| 1．5 融合蛋白的序列分析 | 第36页 |
| 1．6 融合蛋白的浓度测定 | 第36-37页 |
| 2 融合蛋白体外活性试验 | 第37-42页 |
| 2．1 融合蛋白对成纤维细胞增殖的刺激作用 | 第37-39页 |
| 2．2 成骨细胞的鉴定 | 第39-41页 |
| 2．3 成骨细胞爬片实验 | 第41页 |
| 2．4 目的蛋白对成骨细胞的作用 | 第41-42页 |
| 3 融合蛋白体内活性试验 | 第42-46页 |
| 3．1 血清钙水平检测 | 第43-44页 |
| 3．2 清ALP水平检测 | 第44-46页 |
| 总结 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-49页 |
| 附录 | 第49-50页 |
| 1 质粒p~（PIC9）图谱 | 第49页 |
| 2 发表文章 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50页 |