中文摘要 | 第1-6页 |
英文摘要 | 第6-7页 |
第一部分 综述 | 第7-18页 |
1 骨的代谢和骨质疏松症 | 第7-9页 |
2 降钙素 | 第9-11页 |
2.1 降钙素的结构及功能 | 第9-11页 |
2.2 降钙素的应用 | 第11页 |
3 骨生长肽 | 第11-14页 |
3.1 骨生长肽的结构及功能 | 第11-13页 |
3.2 骨生长肽的应用 | 第13-14页 |
4 其它相关因子 | 第14-18页 |
4.1 甲状旁腺激素 | 第14-15页 |
4.2 活性维生素D | 第15-16页 |
4.3 雌激素 | 第16-18页 |
第二部分 材料和方法 | 第18-31页 |
1 实验材料 | 第18-20页 |
1.1 菌株及质粒 | 第18页 |
1.2 细胞株系及实验动物 | 第18页 |
1.3 酶及试剂盒 | 第18-19页 |
1.4 培养基 | 第19页 |
1.5 其它试剂 | 第19页 |
1.6 仪器 | 第19-20页 |
2 培养基及缓冲液的配制 | 第20-22页 |
2.1 细胞培养基 | 第20页 |
2.2 酵母培养基 | 第20-22页 |
2.3 其它缓冲液 | 第22页 |
3 实验方法 | 第22-31页 |
3.1 融合基因的克隆及融合蛋白的表达纯化 | 第22-27页 |
3.1.1 DNA片断的合成 | 第22-23页 |
3.1.2 DNA的限制性酶切 | 第23页 |
3.1.3 DNA片段的连接 | 第23页 |
3.1.4 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第23页 |
3.1.5 从溶液中回收重组片断 | 第23-24页 |
3.1.6 从胶中回收重组片断 | 第24页 |
3.1.7 毕赤酵母感受态细胞的制备及转化 | 第24-25页 |
3.1.8 融合蛋白的分泌表达 | 第25页 |
3.1.9 Tris-Tricine SDS—PAGE蛋白电泳 | 第25-26页 |
3.1.10 融合蛋白的纯化 | 第26页 |
3.1.11 融合蛋白的序列分析 | 第26页 |
3.1.12 融合蛋白浓度的测定 | 第26-27页 |
3.2 融合蛋白体外活性试验 | 第27-29页 |
3.2.1 成纤维细胞的培养及传代 | 第27页 |
3.2.2 成骨细胞的原代培养 | 第27页 |
3.2.3 成骨细胞的传代 | 第27-28页 |
3.2.4 成骨细胞的鉴定 | 第28页 |
3.2.5 血球计数板计数 | 第28页 |
3.2.6 MTT细胞增殖检测 | 第28-29页 |
3.3 融合蛋白体内活性试验 | 第29-31页 |
3.3.1 动物试验设计 | 第29页 |
3.3.2 血清钙检测 | 第29页 |
3.3.3 成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性检测 | 第29-30页 |
3.3.4 血清中ALP水平的测定 | 第30-31页 |
第三部分 结果与讨论 | 第31-46页 |
1 融合基因的克隆及融合蛋白的表达与纯化 | 第31-37页 |
1.1 目的片断的合成 | 第31-32页 |
1.2 重组质粒的鉴定 | 第32-34页 |
1.3 毕氏酵母表达菌株的筛选 | 第34-35页 |
1.4 融合蛋白的纯化 | 第35-36页 |
1.5 融合蛋白的序列分析 | 第36页 |
1.6 融合蛋白的浓度测定 | 第36-37页 |
2 融合蛋白体外活性试验 | 第37-42页 |
2.1 融合蛋白对成纤维细胞增殖的刺激作用 | 第37-39页 |
2.2 成骨细胞的鉴定 | 第39-41页 |
2.3 成骨细胞爬片实验 | 第41页 |
2.4 目的蛋白对成骨细胞的作用 | 第41-42页 |
3 融合蛋白体内活性试验 | 第42-46页 |
3.1 血清钙水平检测 | 第43-44页 |
3.2 清ALP水平检测 | 第44-46页 |
总结 | 第46-47页 |
参考文献 | 第47-49页 |
附录 | 第49-50页 |
1 质粒p~(PIC9)图谱 | 第49页 |
2 发表文章 | 第49-50页 |
致谢 | 第50页 |