| 第一章 文献综述 | 第1-22页 |
| 1．1 引言 | 第11-12页 |
| 1．2 粒细胞集落刺激因子（G-CSF）概述 | 第12-14页 |
| 1．2．1 G-CSF的生物学功能 | 第12-13页 |
| 1．2．2 G-CSF发酵生产研究概况 | 第13-14页 |
| 1．3 基因工程菌发酵工艺的优化 | 第14-15页 |
| 1．3．1 培养基的影响 | 第14页 |
| 1．3．2 培养条件的影响 | 第14-15页 |
| 1．3．2．1 温度 | 第14-15页 |
| 1．3．2．2 pH | 第15页 |
| 1．3．2．3 溶氧（DO） | 第15页 |
| 1．3．2．4 代谢副产物的抑制作用 | 第15页 |
| 1．3．2．5 比生长速率和比产率 | 第15页 |
| 1．4 基因工程菌的高密度培养 | 第15-17页 |
| 1．4．1 重组大肠杆菌高密度培养概述 | 第15-16页 |
| 1．4．2 高密度发酵补料调控 | 第16-17页 |
| 1．5 基因工程药用蛋白的分离、纯化与复性 | 第17-20页 |
| 1．5．1 重组蛋白的复性 | 第18页 |
| 1．5．2 G-CSF的分离、纯化与复性 | 第18-20页 |
| 参考文献 | 第20-22页 |
| 第二章 实验部分 | 第22-32页 |
| 2．1 仪器与试剂 | 第22-23页 |
| 2．1．1 rhG-CSF发酵所需仪器与试剂 | 第22-23页 |
| 2．1．1．1 仪器 | 第22页 |
| 2．1．1．2 试剂 | 第22-23页 |
| 2．1．2 rhG-CSF分离纯化所需仪器与试剂 | 第23页 |
| 2．1．2．1 仪器 | 第23页 |
| 2．1．2．2 试剂 | 第23页 |
| 2．2 实验方法 | 第23-26页 |
| 2．2．1 菌种 | 第23页 |
| 2．2．2 培养基的配制 | 第23-24页 |
| 2．2．2．1 液体培养基的配制 | 第24页 |
| 2．2．2．2 LB固体培养基的配制 | 第24页 |
| 2．2．2．3 微量元素的配制 | 第24页 |
| 2．2．3 培养方法 | 第24-26页 |
| 2．2．3．1 菌种复苏 | 第24页 |
| 2．2．3．2 菌种筛选 | 第24-25页 |
| 2．2．3．3 5L发酵罐间歇培养 | 第25页 |
| 2．2．3．4 5L发酵罐分批流加培养 | 第25页 |
| 2．2．3．5 感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| 2．2．3．6 大肠杆菌的转化 | 第26页 |
| 2．3 结果分析 | 第26-31页 |
| 2．3．1 菌体浓度 | 第26页 |
| 2．3．2 细胞干重的测定 | 第26页 |
| 2．3．3 rhG-CSF表达量 | 第26-27页 |
| 2．3．4 SDS-PAGE | 第27-29页 |
| 2．3．5 PH | 第29页 |
| 2．3．6 Bradford比色法测定蛋白质含量 | 第29-31页 |
| 参考文献 | 第31-32页 |
| 第三章 重组大肠杆菌DH5a／pBV220发酵培养基的优化研究 | 第32-44页 |
| 3．1 前言 | 第32-33页 |
| 3．2 不同培养基种类对工程菌生长和表达的影响 | 第33页 |
| 3．3 M9培养基的优化 | 第33-41页 |
| 3．3．1 碳源种类的选择 | 第33-35页 |
| 3．3．2 氮源种类的选择 | 第35-37页 |
| 3．3．3 优化培养基配方 | 第37-41页 |
| 3．3．3．1 培养基中碳源和氮源配比的优化 | 第37-40页 |
| 3．3．3．2 无机盐配方的优化 | 第40-41页 |
| 3．4 优化培养基中工程菌DH5α／pBV220的培养 | 第41-42页 |
| 3．5 小结 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-44页 |
| 第四章 重组大肠杆菌DH5α／pBV220摇瓶发酵工艺的研究 | 第44-55页 |
| 4．1 前言 | 第44页 |
| 4．2 培养温度对工程菌生长和rhG-CSF表达的影响 | 第44-45页 |
| 4．3 pH值对工程菌生长和rhG-CSF表达的影响 | 第45-46页 |
| 4．4 摇瓶溶氧对工程菌生长和rhG-CSF表达的影响 | 第46-48页 |
| 4．4．1 装液量对工程菌生长和rhG-CSF表达的影响 | 第46-47页 |
| 4．4．2 摇床转速对工程菌生长和rhG-CSF表达的影响 | 第47-48页 |
| 4．5 诱导时机对工程菌生长和rhG-CSF表达的影响 | 第48-50页 |
| 4．6 诱导表达时间对工程菌生长和rhG-CSF表达的影响 | 第50-51页 |
| 4．7 种子菌龄对工程菌生长和rhG-CSF表达的影响 | 第51-52页 |
| 4．8 优化条件下工程菌的培养 | 第52页 |
| 4．9 小结 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-55页 |
| 第五章 重组大肠杆菌DH5α／pBV220在5L发酵罐上的培养 | 第55-68页 |
| 5．1 前言 | 第55页 |
| 5．2 5L发酵罐分批培养 | 第55-61页 |
| 5．2．1 溶氧对工程菌生长和rhG-CSF表达的影响 | 第55-57页 |
| 5．2．2 微量元素和维生素对工程菌生长和rhG-CSF表达的影响 | 第57-58页 |
| 5．2．3 接种量对工程菌生长和rhG-CSF表达的影响 | 第58-59页 |
| 5．2．4 工程菌在M9Ⅳ培养基中分批培养的生长曲线及诱导时机 | 第59-60页 |
| 5．2．5 CT-5发酵罐中优化条件下重组大肠杆菌的分批培养 | 第60-61页 |
| 5．3 5L发酵罐补料分批培养 | 第61-66页 |
| 5．3．1 分批流加培养方案 | 第61页 |
| 5．3．2 工程菌DH5α／pBV220的生长曲线 | 第61-62页 |
| 5．3．3 pH值对工程菌的生长和rhG-CSF表达的影响 | 第62-63页 |
| 5．3．4 流加培养过程中溶氧对工程菌生长和rhG-CSF表达的影响 | 第63-65页 |
| 5．3．4．1 不控制溶氧的流加培养 | 第63-64页 |
| 5．3．4．2 控制溶氧的流加培养 | 第64-65页 |
| 5．3．5 重组大肠杆菌在优化条件下的流加培养 | 第65-66页 |
| 5．4 小结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-68页 |
| 第六章 rhG-CSF的分离纯化 | 第68-77页 |
| 6．1 前言 | 第68页 |
| 6．2 实验方法 | 第68-69页 |
| 6．2．1 菌体的收集和洗涤 | 第68页 |
| 6．2．2 包含体的纯化 | 第68页 |
| 6．2．3 包含体的溶液 | 第68-69页 |
| 6．3 高效疏水色谱对rhG-CSF的复性与同时纯化 | 第69-75页 |
| 6．3．1 洗脱梯度对rhG-CSF的复性与同时纯化的影响 | 第69-70页 |
| 6．3．2 流动相流速对rhG-CSF的复性与同时纯化的影响 | 第70-71页 |
| 6．3．3 不同洗脱条件下进样方式对rhG-CSF的复性与同时纯化的影响 | 第71-72页 |
| 6．3．4 pH对rhG-CSF的复性与同时纯化的影响 | 第72-73页 |
| 6．3．5 rhG-CSF的纯度和质量回收率 | 第73-75页 |
| 6．4 关于蛋白质质量回收率问题的讨论 | 第75页 |
| 6．5 小结 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
