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水稻抗逆境相关基因的分离和功能分析

摘要第1-10页
Abstract第10-12页
缩写名词表第12-13页
1 文献综述第13-47页
   ·植物的抗逆性第13-14页
   ·植物在各种非生物逆境胁迫下的应答、调节途径第14-35页
     ·植物体内非生物逆境胁迫信号传递的一般途径第14-15页
     ·非生物逆境胁迫信号在植物体内传递的信号分子第15-19页
       ·钙离子在植物非生物逆境信号传递中的作用第15页
       ·ABA在植物非生物逆境信号传递中的作用第15-18页
       ·磷脂是逆境胁迫响应过程中的另一重要信号第18-19页
     ·非生物逆境胁迫信号在植物体内传递的几个分支第19-28页
       ·MAPK pathways第21-24页
       ·CDPK pathways第24-26页
       ·CIPK-CBL(SOS)pathways第26-28页
     ·信号传递和胁迫应答的转录调节以及转录后调节第28-35页
       ·传递信号和调控基因表达的转录因子第28-34页
       ·感应和转导胁迫信号的蛋白激酶和其它蛋白酶类第34-35页
   ·提高植物抗逆性的下游功能基因及编码产物第35-40页
     ·渗透调节物质合成酶基因及产物第36-38页
     ·清除活性氧的酶基因及产物第38-39页
     ·保护细胞免受水分胁迫伤害的功能蛋白基因及产物第39-40页
   ·研究植物基因功能的策略和方法第40-46页
     ·基因功能增加或获得第41-43页
     ·基因功能丧失或减弱第43-45页
     ·功能基因研究的其他方法第45-46页
   ·本研究的目的和意义第46-47页
2 材料与方法第47-59页
   ·水稻材料第47页
   ·用于遗传转化的水稻基因片段第47页
   ·实验所用到的菌株、质粒、载体和感受态细胞第47页
   ·DNA的抽提和Southern杂交第47-49页
   ·RNA的抽提,反转录和Northern杂交第49页
   ·PCR、RT-PCR和Real-time PCR的检测第49页
   ·水稻内源基因表达量分析的材料准备第49-50页
   ·遗传转化载体的构建和转化第50-53页
     ·超量表达载体的构建第50-52页
     ·RNAi抑制表达载体的构建第52页
     ·GFP及GUS融合表达载体的构建第52页
     ·遗传转化第52-53页
   ·目标蛋白的亚细胞定位分析第53页
   ·酵母细胞中的生化实验第53-54页
   ·GUS组织化学分析和GUS活性测定第54-55页
   ·成株期转基因植株在大田和PVC管的抗旱实验第55页
   ·OsbZIP23超量表达转基因植株叶片电镜观察第55-56页
   ·OsbZIP23超量表达转基因植株离体条件下失水速率统计第56页
   ·转基因植株的ABA敏感性实验第56页
   ·转基因植株苗期抗逆性实验第56-58页
     ·转基因植株苗期抗旱性分析第56-57页
     ·转基因植株苗期耐盐性分析第57页
     ·转基因植株苗期耐冷性实验第57-58页
   ·转基因植株的基因表达谱分析第58页
   ·游离脯氨酸含量的测定第58页
   ·可溶性糖含量的测定第58-59页
3 结果与分析第59-119页
   ·抗逆相关基因的遗传转化和抗逆筛选第59-66页
     ·转化载体的构建及遗传转化第59-61页
     ·对转基因植株进行超量表达检测第61-63页
     ·部分T_0代转基因植株Southern拷贝数分析第63-64页
     ·转基因植株田间抗逆性筛选与鉴定第64-66页
       ·转基因植株苗期抗旱筛选与鉴定第64-65页
       ·T_1代转基因植株成株期抗旱筛选第65-66页
   ·OsbZIP23基因在水稻非生物逆境中的功能研究第66-101页
     ·OsbZIP23基因的扩增和序列分析第66-69页
     ·OsbZIP23的表达模式分析第69-72页
       ·OsbZIP23在非生物逆境及激素处理后的表达量分析第70-72页
       ·OsbZIP23在不同组织的表达模式第72页
     ·OsbZIP23亚细胞定位和酵母细胞的生化功能分析第72-73页
     ·OsbZIP23蛋白在酵母细胞转录活性分析第73-75页
     ·OsbZIP23超量表达转基因植株抗逆性分析第75-81页
       ·OsbZIP23转基因植株苗期抗盐性分析第75-76页
       ·OsbZIP23转基因家系苗期失水速率分析第76-77页
       ·成株期OsbZIP23转基因植株抗旱性分析第77-78页
       ·OsbZIP23转基因植株ABA敏感性分析第78-81页
     ·OsbZIP23突变体的分离及表型鉴定第81-83页
     ·OsbZIP23突变体植株抗逆性分析第83-87页
       ·OsbZIP23突变体植株苗期抗盐性分析第83-84页
       ·OsbZIP23突变体植株发芽ABA敏感性分析第84-86页
       ·OsbZIP23突变体植株生长的ABA敏感性分析第86-87页
     ·OsbZIP23转基因植株的基因表达谱分析第87-101页
   ·水稻CIPK蛋白激酶家族的分离及功能鉴定第101-119页
     ·水稻中CIPK蛋白激酶家族基因的分离及结构分析第101-105页
     ·CIPK蛋白激酶家族逆境表达谱分析第105-109页
     ·OsCIPK15功能分析第109-112页
       ·OsCIPK15的启动子分析第109-110页
       ·OsCIPK15的超量表达植株的耐盐性分析第110-112页
       ·OsCIPK15超量表达植株对Na~+、K~+吸收的分析第112页
     ·OsCIPK03和OsCIPK12的功能分析第112-115页
       ·OsCIPK03超量表达植株耐低温能力分析第112-113页
       ·OsCIPK12超量表达植株耐干旱能力分析第113-115页
       ·超量表达植株体内可溶性糖和游离脯氨酸的含量分析第115页
     ·水稻中CIPK与CBL基因家族突变体的收集第115-119页
4.讨论第119-125页
   ·CIPK蛋白激酶在水稻抗逆性提高作用机理探讨第119-121页
   ·OsbZIP23在水稻逆境应答调控中的作用第121-123页
   ·转基因策略在提高植物抗逆性方面的应用第123-125页
参考文献第125-140页
附录A Protocols第140-151页
附录B 个人简历第151-152页
致谢第152页

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