| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-23页 |
| ·二化螟的危害及转基因水稻的发展 | 第11-12页 |
| ·Bt毒素的杀虫机理 | 第12-14页 |
| ·国内外Bt受体的研究进展 | 第14-18页 |
| ·氨肽酶N(APN) | 第15-16页 |
| ·钙粘蛋白(Cadherin-like protein,CAD) | 第16-18页 |
| ·碱性磷酸酯酶(alkaline phosphatase,ALP) | 第18页 |
| ·肌动蛋白(Actin) | 第18页 |
| ·糖酯(Glycolipid) | 第18页 |
| ·RACE技术 | 第18-20页 |
| ·昆虫杆状病毒表达系统 | 第20-22页 |
| ·本论文研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| 第二章 研究内容和技术路线 | 第23-25页 |
| ·主要研究内容 | 第23页 |
| ·克隆APN和CAD基因序列及序列分析 | 第23页 |
| ·APN和CAD在Tn细胞系中的表达及功能鉴定 | 第23页 |
| ·APN和CAD研究的技术路线 | 第23-25页 |
| ·APN研究的技术路线(图2.1) | 第23-24页 |
| ·CAD研究的技术路线(图2.2) | 第24-25页 |
| 第三章 APN基因的克隆及序列分析 | 第25-43页 |
| ·试验材料和方法 | 第25-27页 |
| ·材料和试剂 | 第25页 |
| ·细菌培养基 | 第25页 |
| ·质粒DNA抽提液 | 第25-26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·仪器设备 | 第26-27页 |
| ·试验方法 | 第27-31页 |
| ·RNA的提取 | 第27页 |
| ·反转录 | 第27-28页 |
| ·基因克隆引物设计 | 第28-29页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第29页 |
| ·PCR纯化产物与T-EASY载体连接 | 第29-30页 |
| ·转化 | 第30页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第30页 |
| ·PCR鉴定 | 第30-31页 |
| ·序列测定 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-42页 |
| ·APN基因的克隆、鉴定 | 第31-33页 |
| ·序列结果与分析 | 第33-42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| 第四 CAD基因的克隆及序列分析 | 第43-60页 |
| ·试验材料和方法 | 第43页 |
| ·试验方法 | 第43-45页 |
| ·RNA的提取 | 第43页 |
| ·反转录合成 | 第43页 |
| ·基因克隆引物设计: | 第43-44页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第44页 |
| ·PCR纯化产物与T-EASY载体连接 | 第44页 |
| ·转化 | 第44页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第44页 |
| ·PCR鉴定 | 第44页 |
| ·序列测定 | 第44-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-59页 |
| ·CAD基因的克隆、鉴定 | 第45页 |
| ·核酸序列结果与分析 | 第45-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| 第五章 APN和CAD的表达及鉴定 | 第60-73页 |
| ·材料和试剂 | 第60-62页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·主要试剂 | 第60页 |
| ·部分储存液配方 | 第60-62页 |
| ·试验方法 | 第62-68页 |
| ·酶切重组和供体质粒 | 第62页 |
| ·回收 | 第62-63页 |
| ·APN回收产物酶切 | 第63页 |
| ·回收 | 第63页 |
| ·连接 | 第63页 |
| ·转化 | 第63-64页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第64页 |
| ·双酶切鉴定 | 第64页 |
| ·DH10B_(ac)的制作 | 第64-65页 |
| ·转DH10B_(ac) | 第65页 |
| ·挑单菌落 | 第65页 |
| ·提取重组DNA | 第65页 |
| ·PCR鉴定 | 第65-66页 |
| ·共转染 | 第66页 |
| ·Cry1Ab毒蛋白的纯化 | 第66-67页 |
| ·蛋白鉴定 | 第67-68页 |
| ·结果与分析 | 第68-72页 |
| ·重组转移载体pFastBacHTb/APN和pFastBacHTb/CAD的构建 | 第68-69页 |
| ·重组杆状病毒的鉴定 | 第69-70页 |
| ·重组杆状病毒转染Tn细胞 | 第70页 |
| ·APN、CAD基因在昆虫Tn细胞中的表达 | 第70-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| 第六章 主要结论 | 第73-74页 |
| 1.首次克隆了二化螟的APN基因序列 | 第73页 |
| 2.克隆了二化螟的CAD基因序列 | 第73页 |
| 3.利用杆状病毒昆虫表达系统表达APN和CAD | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 作者简历 | 第83页 |
