提要 | 第1-10页 |
前言 | 第10-12页 |
第一章 文献回顾 | 第12-23页 |
一、hsp60 的分类和分布 | 第12-13页 |
二、hsp60 的基本功能 | 第13-14页 |
1. hsp60 的转运功能 | 第13页 |
2. hsp60 的细胞保护功能 | 第13-14页 |
三、hsp60 与免疫 | 第14-19页 |
1. 作为危险信号的hsp60 | 第14页 |
2. hsp60 与自身免疫病 | 第14-15页 |
3. hsp60 在自身免疫性关节炎动物模型中的作用 | 第15-16页 |
4. hsp60 在免疫耐受方面的作用机制 | 第16-17页 |
5. hsp60 与临床免疫 | 第17-18页 |
6. hsp60 与基础免疫 | 第18-19页 |
四、hsp60 作用的分子机制 | 第19-20页 |
五、hsp60 在疫苗方面的研究 | 第20-23页 |
第二章 材料和方法 | 第23-47页 |
一、实验材料 | 第23-29页 |
二、实验方法 | 第29-47页 |
·白色念珠菌的培养 | 第29页 |
·总RNA 的提取 | 第29-30页 |
·对提取的总RNA 进行电泳检测 | 第30-31页 |
·RT-PCR 反应 | 第31-33页 |
·对RT-PCR 产物进行琼脂糖凝胶电泳检测 | 第33页 |
·hsp60 RT-PCR 产物回收及琼脂糖凝胶电泳检测 | 第33页 |
·克隆载体的构建及鉴定 | 第33-37页 |
·pET286 - hsp60 表达载体的构建 | 第37-39页 |
·重组白色念珠菌hsp60融合蛋白在大肠杆菌中诱导表达 | 第39页 |
·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第39-41页 |
·Western Blot | 第41-42页 |
·镍亲和层析法纯化重组蛋白hsp60 | 第42-43页 |
·动物免疫 | 第43-44页 |
·ELISA 法检测小鼠血清抗体效价 | 第44-45页 |
·淋巴细胞转化试验流程 | 第45-46页 |
·动物保护实验 | 第46页 |
·白色念珠菌攻击实验 | 第46页 |
·统计学处理方法 | 第46-47页 |
第三章 实验结果 | 第47-65页 |
一、总RNA提取 | 第47页 |
二、RT-PCR产物 | 第47-48页 |
三、RT-PCR产物纯化 | 第48页 |
四、白色念珠菌 hsp60 基因 TA 克隆载体的成功构建 | 第48-55页 |
五、白色念珠菌hsp60基因表达载体的成功构建 | 第55-59页 |
六、重组hsp60融合蛋白在大肠杆菌中的诱导表达、纯化及鉴定 | 第59-60页 |
七、免疫小鼠抗融合蛋白 hsp60 特异性抗体效价 | 第60-61页 |
八、免疫小鼠淋巴细胞转化实验 | 第61-62页 |
九、免疫小鼠保护实验 | 第62-65页 |
第四章 讨论 | 第65-72页 |
一、白色念珠菌感染背景资料及靶蛋白的选择 | 第65-66页 |
二、总RNA 的提取 | 第66-67页 |
三、表达系统的选择 | 第67-69页 |
四、融合蛋白hsp60 的免疫活性及其免疫机制 | 第69-72页 |
结论 | 第72-73页 |
本课题创新性的自我评价 | 第73-74页 |
参考文献 | 第74-91页 |
攻博期间发表的学术论文 | 第91-93页 |
中文摘要 | 第93-96页 |
英文摘要 | 第96-100页 |
致谢 | 第100页 |