| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-27页 |
| ·草甘膦(glyphosate) | 第10-11页 |
| ·草甘膦的毒性机理 | 第11-13页 |
| ·草甘膦抗性获得的策略一:草甘膦作用靶酶的基因改造 | 第13-18页 |
| ·草甘膦作用靶酶——EPSP合成酶编码基因的确定 | 第13页 |
| ·EPSP合成酶的三维结构及与草甘膦的作用分子机理 | 第13-14页 |
| ·EPSP合成酶在植物细胞中的定位 | 第14页 |
| ·草甘膦抗性获得途径 | 第14-18页 |
| ·草甘膦抗性获得的策略二: 草甘膦降解途径及相关基因研究 | 第18-20页 |
| ·降解草甘膦细菌的分离和降解途径 | 第18-19页 |
| ·降解草甘膦基因的研究 | 第19-20页 |
| ·草甘膦抗性获得的策略三: 草甘膦的生物转化 | 第20-24页 |
| ·抗草甘膦转基因作物的育种 | 第24-26页 |
| ·抗草甘膦转基因作物的发展 | 第26-27页 |
| 2 材料和方法 | 第27-37页 |
| ·材料 | 第27-30页 |
| ·菌株与质粒 | 第27-28页 |
| ·试剂 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·溶液 | 第28-30页 |
| ·仪器设备 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-37页 |
| ·B.licheniformis总DNA的提取 | 第30页 |
| ·PCR扩增gat基因 | 第30-31页 |
| ·PCR产物的纯化与双酶切 | 第31-32页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第32页 |
| ·大肠杆菌超级感受态的制备 | 第32页 |
| ·转化 | 第32-33页 |
| ·质粒的碱裂解抽提 | 第33页 |
| ·阳性克隆的检出 | 第33页 |
| ·定点诱变 | 第33-35页 |
| ·蛋白的诱导表达 | 第35页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的制备 | 第35-36页 |
| ·电泳、染色及脱色 | 第36页 |
| ·蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| ·酶反应动力学 | 第37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-45页 |
| ·B.licheniformis基因组DNA的提取 | 第37页 |
| ·PCR扩增gat基因 | 第37-38页 |
| ·pGEX-gat_n重组质粒的构建与鉴定 | 第38-39页 |
| ·草甘膦N-乙酰转移酶的定点诱变 | 第39-41页 |
| ·野生型和突变型GAT蛋白的诱导表达 | 第41页 |
| ·野生型和突变型GAT蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| ·野生型和突变型GAT酶动力学分析 | 第42-45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| 参考文献 | 第48-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
