鸡贮精腺差异表达基因的研究
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-18页 |
| ·国内外关于贮精腺的研究现状、水平和发展趋势 | 第9-12页 |
| ·贮精腺的组织结构和细胞组成 | 第9页 |
| ·贮精腺分泌物的成份 | 第9-10页 |
| ·贮精腺内精子存活时间及空间分布 | 第10-12页 |
| ·mRNA 差异显示技术（DDRT-PCR）简介 | 第12-15页 |
| ·DDRT-PCR 的原理 | 第12页 |
| ·DDRT-PCR 的优点与局限性 | 第12-13页 |
| ·DDRT-PCR 的应用 | 第13-14页 |
| ·DDRT-PCR 的发展 | 第14-15页 |
| ·半定量RT-PCR 法鉴定差异表达片段 | 第15-16页 |
| ·本实验的目的和意义 | 第16-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-29页 |
| ·实验材料 | 第18-22页 |
| ·实验鸡的选择和取样 | 第18页 |
| ·主要药品及试剂的配制 | 第18-22页 |
| ·实验方法及步骤 | 第22-28页 |
| ·组织总RNA 的提取 | 第22页 |
| ·反转录－－cDNA 第一链的获得 | 第22-23页 |
| ·DDRT-PCR | 第23页 |
| ·琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第23-24页 |
| ·凝胶的银染处理 | 第24页 |
| ·差异片段的回收及二次PCR | 第24页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第24-25页 |
| ·感受态细胞的制备（CaCl_2法） | 第25页 |
| ·PCR 产物的T 载体连接 | 第25页 |
| ·转化 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的保种和质粒DNA 的小规模提取 | 第26页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第26-27页 |
| ·半定量检测差异条带在不同处理下的表达 | 第27-28页 |
| ·数据统计及分析 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-41页 |
| ·实验鸡受精率的分布 | 第29页 |
| ·总RNA 样品制备的结果 | 第29-30页 |
| ·DDRT-PCR 结果 | 第30-32页 |
| ·差异片段回收及二次PCR | 第32页 |
| ·差异片段基因克隆、鉴定 | 第32-33页 |
| ·差异片段测序及比对 | 第33-38页 |
| ·SST01 碱基序列及比对结果 | 第33-34页 |
| ·SST02 碱基序列及比对结果 | 第34-35页 |
| ·SST03 碱基序列及比对结果 | 第35页 |
| ·SST04 碱基序列及比对结果 | 第35-36页 |
| ·SST05 碱基序列及比对结果 | 第36-37页 |
| ·SST06 碱基序列及比对结果 | 第37-38页 |
| ·半定量RT-PCR 检测差异条带的表达 | 第38-41页 |
| ·半定量RT-PCR 条件的优化 | 第38-40页 |
| ·半定量RT-PCR 结果 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-47页 |
| ·实验对象的处理和选择 | 第41页 |
| ·组织总RNA 的提取 | 第41-42页 |
| ·反应所用引物的筛选 | 第42页 |
| ·反应条件对实验结果的影响 | 第42-43页 |
| ·剔除假阳性条带 | 第43页 |
| ·差异序列的生物信息学分析 | 第43-46页 |
| ·SST01 功能预测 | 第43-44页 |
| ·SST02 功能预测 | 第44-45页 |
| ·SST03 功能预测 | 第45-46页 |
| ·SST04～SST05 | 第46页 |
| ·SST06 | 第46页 |
| ·差异条带在高低受精率组中表达量差异的生产意义 | 第46-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第55页 |
