| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-7页 |
| Ⅰ 文献综述 | 第7-16页 |
| 1 血管生长抑制因子KRINGLE 5概述 | 第9-14页 |
| ·血管生长抑制因子Kringle 5的结构 | 第9-10页 |
| ·Kringle 5抑制血管增生的分子机制 | 第10-13页 |
| ·Kringle 5与内皮细胞的迁移、增殖和凋亡 | 第10-11页 |
| ·Kringle 5与血管增生平衡 | 第11-12页 |
| ·Kringle 5与炎症反应 | 第12-13页 |
| ·Kringle 5对血管增生性疾病治疗的实验研究 | 第13页 |
| ·基因重组kringle 5的研究 | 第13-14页 |
| 2 本研究的目的、意义 | 第14-15页 |
| 3 研究开发的方向和重点 | 第15-16页 |
| Ⅱ 实验部分 | 第16-33页 |
| 1 实验材料 | 第16-17页 |
| ·菌种及质粒 | 第16页 |
| ·试剂 | 第16-17页 |
| ·培养基 | 第17页 |
| ·仪器设备 | 第17页 |
| 2 工程菌的发酵 | 第17-18页 |
| 3 纯化工艺研究 | 第18-26页 |
| ·发酵液的处理 | 第18-19页 |
| ·重组Kringle 5的纯化 | 第19-26页 |
| ·盐析法 | 第20-22页 |
| ·等电点沉淀 | 第22页 |
| ·色谱分离法 | 第22-26页 |
| 4 分析与检测 | 第26-33页 |
| ·菌体浓度的测定 | 第26-27页 |
| ·变性聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳 | 第27-30页 |
| ·试液的配置 | 第27-29页 |
| ·电泳样品制备 | 第29页 |
| ·SDS-PAGE电泳条件 | 第29-30页 |
| ·蛋白质的含量分析 | 第30-31页 |
| ·重组Kringle 5生物活性的测定 | 第31-33页 |
| Ⅲ 结果与讨论 | 第33-46页 |
| 1 工程菌发酵结果与讨论 | 第33-34页 |
| 2 纯化工艺结果与讨论 | 第34-40页 |
| ·中性盐沉淀法纯化工艺结果与讨论 | 第34-36页 |
| ·硫酸铵分级沉淀工艺结果与讨论 | 第34-35页 |
| ·氯化钠分级沉淀工艺结果与讨论 | 第35-36页 |
| ·等电点沉淀法纯化工艺结果与讨论 | 第36-38页 |
| ·柱色谱纯化工艺结果与讨论 | 第38-40页 |
| ·Ni~(2+)螯合的Chelating Sepharose Fast Flow亲和柱色谱 | 第38-39页 |
| ·Sephadex G-75凝胶排阻柱色谱 | 第39-40页 |
| 3 分析与检测实验结果与讨论 | 第40-46页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第40-42页 |
| ·重组Kringle 5的含量分析 | 第42-44页 |
| ·活性鉴定 | 第44-46页 |
| Ⅳ 结论 | 第46-48页 |
| 1 结论 | 第46页 |
| 2 存在的主要问题 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 致谢 | 第53页 |