| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1. 引言 | 第10-26页 |
| ·Nudix 水解酶超家族概况 | 第10-18页 |
| ·大肠杆菌Nudix 水解酶 | 第11-14页 |
| ·人源Nudix 水解酶 | 第14-18页 |
| ·ADP 核糖焦磷酸水解酶亚家族概况 | 第18-19页 |
| ·ADP 核糖焦磷酸水解酶亚家族的晶体结构 | 第19-23页 |
| ·大肠杆菌ADP-Ribose 焦磷酸水解酶的晶体结构 | 第19-22页 |
| ·人源ADP-Ribose 焦磷酸水解酶的晶体结构 | 第22-23页 |
| ·ADP 核糖焦磷酸水解酶亚家族的催化反应机理 | 第23-25页 |
| ·人源ADP 核糖焦磷酸水解酶的研究进展 | 第25-26页 |
| 2. 材料和方法 | 第26-39页 |
| ·材料和试剂 | 第26-28页 |
| ·常用试剂和材料 | 第26页 |
| ·菌株 | 第26页 |
| ·仪器 | 第26-28页 |
| ·方法 | 第28-39页 |
| ·hNUDT5基因的克隆、表达载体和菌株构建 | 第28页 |
| ·ΔhNUDT5突变体的构建 | 第28-29页 |
| ·hNUDT5的表达和纯化 | 第29-32页 |
| ·全长hNUDT5 N端6HIS tag的融合蛋白的表达纯化 | 第29页 |
| ·C末端9氨基酸切除型的表达纯化 | 第29-30页 |
| ·硒代甲硫氨酸取代的ΔhNUDT5的表达纯化 | 第30-32页 |
| ·ΔhNUDT5（肽段1-210）突变体的表达纯化 | 第32页 |
| ·蛋白质浓度测定方法 | 第32页 |
| ·蛋白质纯度鉴定和浓缩 | 第32页 |
| ·溶液中蛋白质分子尺寸和聚集状态分析 | 第32-33页 |
| ·晶体生长－悬滴气相扩散法 | 第33-36页 |
| ·结晶条件筛选 | 第33页 |
| ·全长hNUDT5 N端6HIS tag融合蛋白晶体的生长和优化 | 第33页 |
| ·ΔhNUDT5和底物ADPR二元复合物晶体的生长和优化 | 第33-34页 |
| ·ΔhNUDT5和产物AMP及R5P复合物晶体的生长和优化 | 第34页 |
| ·ΔhNUDT5和产物AMP及Mg三元复合物晶体2 | 第34页 |
| ·ΔhNUDT5和底物类似物AMPCPR及Mg三元复合物晶体2 | 第34-35页 |
| ·硒代ΔhNUDT5晶体的生长和优化 | 第35-36页 |
| ·X-射线晶体衍射和数据处理 | 第36-37页 |
| ·晶体的低温流冷冻保护（cryo cooli | 第36页 |
| ·数据收集和处理 | 第36-37页 |
| ·结构解析 | 第37-38页 |
| ·多波长反常散射法解析相位 | 第37页 |
| ·初始模型的建立和结构精修 | 第37-38页 |
| ·初始模型的建立 | 第37页 |
| ·结构精修 | 第37-38页 |
| ·hNUDT5 酶活力的检测 | 第38-39页 |
| 3. 结果 | 第39-62页 |
| ·全长hNUDT5 的表达、纯化和结晶 | 第39-41页 |
| ·ΔhNUDT5 截短体的克隆表达、纯化和结晶 | 第41-46页 |
| ·hNUDT5 各种晶体的结构解析 | 第46-60页 |
| ·全长hNUDT5 apo形式晶体的结构 | 第49-51页 |
| ·ΔhNUDT5和底物ADPR二元复合物晶体的结构 | 第51-54页 |
| ·ΔhNUDT5和产物AMP及Mg三元复合物晶体的结构2 | 第54-56页 |
| ·ΔhNUDT5和底物类似物AMPCPR及Mg三元复合物晶体的结构2 | 第56-60页 |
| ·hNUDT5 酶活力的检测 | 第60-62页 |
| 4. 讨论 | 第62-73页 |
| ·hNUDT5 和大肠杆菌 ADP 核糖焦磷酸水解酶的比较 | 第62-66页 |
| ·hNUDT5 和 hNUDT9 的比较 | 第66-68页 |
| ·ΔhNUDT5 突变体的动力学研究 | 第68-71页 |
| ·和底物嘌呤环识别相关氨基酸突变体的影响 | 第68-69页 |
| ·和底物磷酸分子和核糖残基结合相关氨基酸突变体的影响 | 第69-70页 |
| ·和底物活性相关氨基酸突变体的影响 | 第70-71页 |
| ·hNUDT5 的催化反应机理模型 | 第71-73页 |
| 5. 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-86页 |
| 蛋白数据库入口 PDB 号 | 第86-87页 |
| 附表 | 第87-88页 |
| 发表文章目录 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
