中文摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-7页 |
缩略语表 | 第7-13页 |
第一章 文献综述 | 第13-42页 |
1 马铃薯遗传转化研究进展 | 第13-31页 |
·马铃薯转化的再生系统及靶组织的选择 | 第14-15页 |
·愈伤组织再生系统 | 第14页 |
·直接分化再生系统 | 第14-15页 |
·原生质体再生系统 | 第15页 |
·马铃薯遗传转化的方法 | 第15-22页 |
·农杆菌介导的遗传转化 | 第15-20页 |
·农杆菌-植物间基因转移的分子基础 | 第16-17页 |
·农杆菌介导基因转化的方法 | 第17-18页 |
·马铃薯基因工程中农杆菌介导的遗传转化 | 第18-20页 |
·基因枪法遗传转化 | 第20-21页 |
·微束激光穿刺转化法 | 第21页 |
·PEG 介导法 | 第21页 |
·超声波介导法 | 第21-22页 |
·转基因植物中的标记基因 | 第22-31页 |
·植物遗传转化中常用的标记基因 | 第22-23页 |
·标记基因的安全性问题 | 第23页 |
·转基因作物中标记基因的消除 | 第23-25页 |
·目标基因及其产物的安全性问题 | 第25-26页 |
·外源基因在转基因后代中的整合、表达和遗传 | 第26-27页 |
·外源基因在植物体内的整合 | 第26页 |
·转基因植株的遗传行为 | 第26-27页 |
·转基因沉默及对策 | 第27-30页 |
·转基因植物的商业化生产 | 第30-31页 |
2 基因工程技术在马铃薯遗传改良上的应用 | 第31-41页 |
·马铃薯淀粉基因工程 | 第32-37页 |
·淀粉在食品及其它工业中的应用 | 第32-33页 |
·淀粉的生物合成 | 第33-34页 |
·ADPG 焦磷酸化酶基因研究与马铃薯高淀粉基因工程 | 第34-37页 |
·AGPase 的功能 | 第34页 |
·AGPase 的定位 | 第34页 |
·AGPase 的酶学 | 第34-35页 |
·AGPase 的分子生物学 | 第35-36页 |
·基因工程提高淀粉含量 | 第36-37页 |
·马铃薯抗病基因工程及广谱抗病策略的应用 | 第37-41页 |
·过敏反应 | 第38页 |
·hrp 基因与抗病的研究应用 | 第38-41页 |
·hrp 基因的遗传组成 | 第38-39页 |
·hrp 基因结构和功能保守性 | 第39页 |
·hrp 基因的表达和调控 | 第39页 |
·hrp 基因产物及其功能 | 第39-40页 |
·hrp 基因与马铃薯广谱抗病基因工程 | 第40-41页 |
3 本研究的目的意义 | 第41-42页 |
第二章 马铃薯再生体系的建立 | 第42-49页 |
1 材料与方法 | 第42-44页 |
·材料 | 第42页 |
·植物材料 | 第42页 |
·植物培养基 | 第42页 |
·方法 | 第42-44页 |
·外植体材料的准备 | 第42-43页 |
·马铃薯无菌苗的快繁 | 第43页 |
·马铃薯试管苗的复壮 | 第43页 |
·再生体系的建立 | 第43-44页 |
·茎段和叶片的再生和培养基筛选 | 第43页 |
·芽的分化 | 第43-44页 |
·外植体创伤方式与愈伤的发生 | 第44页 |
2 结果与分析 | 第44-47页 |
·茎段、叶片愈伤组织的发生 | 第45-46页 |
·芽的分化 | 第46页 |
·外植体创伤方式与愈伤的发生 | 第46-47页 |
3 讨论 | 第47-49页 |
第三章 农杆菌介导马铃薯遗传转化体系的优化研究 | 第49-63页 |
1 材料和方法 | 第49-52页 |
·材料 | 第49页 |
·植物材料 | 第49页 |
·农杆菌菌株与质粒 | 第49页 |
·抗生素、选择试剂及其浓度设置 | 第49页 |
·方法 | 第49-52页 |
·转化方法 | 第49-50页 |
·农杆菌工程菌的培养和活化 | 第50页 |
·外植体的预培养 | 第50页 |
·外植体的转化 | 第50页 |
·转化体的筛选和抗性芽的获得 | 第50页 |
·遗传转化体系的优化 | 第50-52页 |
·植物材料的生长状态对遗传转化的影响 | 第50-51页 |
·受体材料Kan 选择压力的确定 | 第51页 |
·对愈伤形成的选择压力 | 第51页 |
·对生根的选择压力 | 第51页 |
·茎段和叶片遗传转化的效果比较 | 第51页 |
·工程菌浓度及侵染时间对遗传转化的影响 | 第51页 |
·预培养时间对遗传转化的影响 | 第51页 |
·共培养时间对遗传转化的影响 | 第51页 |
·抗生素的抑菌试验 | 第51-52页 |
·梯度筛选对遗传转化的影响 | 第52页 |
2 结果与分析 | 第52-59页 |
·植物材料的生理状态对遗传转化的影响 | 第52-53页 |
·受体材料Kan 适合选择压力 | 第53-54页 |
·愈伤诱导过程中Kan 适合浓度 | 第53-54页 |
·生根过程中Kan 适合浓度 | 第54页 |
·茎段与叶片遗传转化效果比较 | 第54-55页 |
·工程菌浓度及侵染时间对遗传转化的影响 | 第55-56页 |
·预培养时间对遗传转化的影响 | 第56页 |
·共培养时间对遗传转化的影响 | 第56-57页 |
·抗生素的抑菌效果及对遗传转化的影响 | 第57-58页 |
·梯度筛选对遗传转化的影响 | 第58-59页 |
3 讨论 | 第59-63页 |
·关于马铃薯基因转化受体系统的建立 | 第59页 |
·菌种的活力对遗传转化的影响 | 第59-60页 |
·农杆菌与再生之间的矛盾及农杆菌污染问题 | 第60页 |
·农杆菌与外植体的共培养 | 第60-61页 |
·抗生素对转化的影响 | 第61-62页 |
·转化中采用两阶段选择培养的意义 | 第62-63页 |
第四章 glgC 基因的导入与转基因植株的鉴定 | 第63-80页 |
1 材料与方法 | 第63-72页 |
·材料 | 第63-64页 |
·植物材料与繁殖 | 第63-64页 |
·农杆菌菌株及质粒 | 第64页 |
·酶和试剂 | 第64页 |
·主要培养基的配制 | 第64页 |
·方法 | 第64-72页 |
·质粒的PCR 鉴定 | 第64-66页 |
·农杆菌质粒DNA 提取(碱裂解法) | 第65-66页 |
·PCR 鉴定 | 第66页 |
·转glgC 基因马铃薯的培育 | 第66页 |
·转基因马铃薯植株PCR 检测 | 第66-68页 |
·马铃薯叶片总DNA 提取(SDS 法) | 第66-67页 |
·转化植株PCR 检测 | 第67-68页 |
·转化植株总DNA 的Southern 检测 | 第68-70页 |
·转基因植株的RT-PCR 检测 | 第70-71页 |
·转基因植株微型薯的获得 | 第70页 |
·马铃薯块茎总RNA 的提取 | 第70-71页 |
·转基因植株RT-PCR 检测 | 第71页 |
·转基因植株AGPase 酶活性、淀粉和还原糖的提取与测定 | 第71-72页 |
·AGPase 的提取和活性测定 | 第71页 |
·淀粉提取与含量测定 | 第71-72页 |
·还原糖含量测定 | 第72页 |
2 结果与分析 | 第72-78页 |
·质粒的PCR 鉴定 | 第72-73页 |
·转基因马铃薯植株再生 | 第73页 |
·转基因植株PCR 鉴定 | 第73-74页 |
·转基因马铃薯Southern 杂交鉴定 | 第74-75页 |
·转基因植株的RT-PCR 检测 | 第75-76页 |
·转基因马铃薯块茎AGPase 活性、淀粉和还原糖含量测定分析 | 第76-78页 |
3 讨论 | 第78-80页 |
第五章 hrp 基因的导入与转基因植株的鉴定 | 第80-93页 |
1 材料与方法 | 第80-84页 |
·材料 | 第80-81页 |
·植物材料与繁殖 | 第80-81页 |
·农杆菌菌株及质粒 | 第81页 |
·酶和试剂 | 第81页 |
·方法 | 第81-84页 |
·质粒的PCR 鉴定 | 第81-82页 |
·马铃薯遗传转化和植株再生 | 第82页 |
·转基因马铃薯植株PCR 检测 | 第82页 |
·转基因马铃薯的Southern 杂交检测 | 第82页 |
·转基因植株的RT-PCR 检测 | 第82-83页 |
·马铃薯叶片总RNA 的提取 | 第82-83页 |
·转基因植株RT-PCR 检测 | 第83页 |
·转hrp 基因植株抗病性测定 | 第83-84页 |
·P.infestans 接种物制备 | 第83页 |
·Erwinia persicinus 接种物制备 | 第83-84页 |
·接种方法 | 第84页 |
·病斑生长速率(Lesion Growth Rate,LGR)测量、记录及统计分析 | 第84页 |
2 结果与分析 | 第84-91页 |
·质粒的PCR 鉴定 | 第84-85页 |
·转基因马铃薯植株再生 | 第85-86页 |
·转基因植株PCR 鉴定 | 第86-87页 |
·转基因马铃薯Southern 杂交鉴定 | 第87-88页 |
·转基因植株的 RT-PCR 检测 | 第88-89页 |
·转基因植株抗病性测定 | 第89-91页 |
3 讨论 | 第91-93页 |
第六章 讨论 | 第93-98页 |
1 马铃薯遗传转化中的几个问题 | 第93-94页 |
2 AGPase 基因与马铃薯高淀粉育种 | 第94-95页 |
3 拟过敏性反应与马铃薯广谱抗病育种 | 第95-97页 |
4 马铃薯基因工程尚存的不足 | 第97-98页 |
结 论 | 第98-100页 |
图 版 Ⅰ | 第100-101页 |
图 版 Ⅱ | 第101-102页 |
图 版 Ⅲ | 第102-103页 |
图 版 说 明 | 第103-104页 |
参考文献 | 第104-119页 |
附录 博士在读期间发表论文 | 第119-120页 |
致 谢 | 第120-121页 |
导师简介 | 第121-122页 |
作者介绍 | 第122-123页 |