| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 前言 | 第10-18页 |
| 1 丙酮酸脱氢酶复合体的概述 | 第10-13页 |
| ·丙酮酸脱氢酶复合体的组成及分布 | 第10-11页 |
| ·丙酮酸脱氢酶复合体的催化机理 | 第11-12页 |
| ·丙酮酸脱氢酶复合体的调控 | 第12-13页 |
| 2 丙酮酸脱羧酶的研究进展 | 第13-17页 |
| ·丙酮酸脱羧酶的结构组成 | 第13-14页 |
| ·丙酮酸脱羧酶的特性 | 第14-15页 |
| ·丙酮酸脱羧酶的基因表达研究进展 | 第15-16页 |
| ·丙酮酸脱羧酶的应用 | 第16-17页 |
| 3 研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 材料与方法 | 第18-36页 |
| 1 材料、试剂及仪器 | 第18-22页 |
| ·材料 | 第18-19页 |
| ·试剂 | 第19-21页 |
| ·仪器 | 第21-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-36页 |
| ·大肠杆菌丙酮酸脱羧酶基因的克隆与表达 | 第22-29页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA(pGEX-KG)的提取 | 第22页 |
| ·大肠杆菌总DNA的提取 | 第22页 |
| ·PCR扩增 | 第22-23页 |
| ·质粒DNA和PCR产物的酶切 | 第23-24页 |
| ·酶切结果的检测及其酶切产物的回收 | 第24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·连接和转化 | 第24-25页 |
| ·重组子的筛选 | 第25-26页 |
| ·外源基因的诱导表达 | 第26页 |
| ·菌体总蛋白的制备 | 第26页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第26-27页 |
| ·表达产物的分离纯化 | 第27-28页 |
| ·丙酮酸脱羧酶活性的测定 | 第28-29页 |
| ·水稻丙酮酸脱羧酶基因的克隆与表达 | 第29-36页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA(pHIL-S1)的提取 | 第29页 |
| ·水稻丙酮酸脱羧酶a，B亚基基因的获得 | 第29-30页 |
| ·酶切与连接 | 第30-31页 |
| ·连接产物转化 | 第31页 |
| ·重组子的筛选 | 第31-32页 |
| ·连接产物转化入酵母中 | 第32-33页 |
| ·酵母阳性重组子的筛选 | 第33-34页 |
| ·诱导表达 | 第34-35页 |
| ·pHIL-PDC-A和pHIL-PDC-B的体外组装 | 第35页 |
| ·丙酮酸脱羧酶活性的测定 | 第35-36页 |
| 结果与分析 | 第36-47页 |
| 1 大肠杆菌丙酮酸脱羧酶基因的克隆与表达 | 第36-40页 |
| ·pGEX-PDC表达载体的构建 | 第36-38页 |
| ·目的片段的获得 | 第36-37页 |
| ·载体的构建 | 第37-38页 |
| ·丙酮酸脱羧酶基因的诱导表达 | 第38-39页 |
| ·丙酮酸脱羧酶的分离纯化 | 第39-40页 |
| ·丙酮酸脱羧酶活性的测定 | 第40页 |
| 2 水稻丙酮酸脱羧酶基因的克隆与表达 | 第40-47页 |
| ·pHIL-PDC-A和pHIL-PDC-B表达载体的构建 | 第40-44页 |
| ·连接产物(pHIL-PDC-A和pHIL-PDC-B)转化入酵母的检测 | 第44-45页 |
| ·诱导表达 | 第45-46页 |
| ·pHIL-PDC-A和pHIL-PDC-B的体外组装及其活性的结果检测 | 第46-47页 |
| 讨论 | 第47-49页 |
| 小结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 英文缩写及中英文全名对照表 | 第54-55页 |
| 在读期间发表文章 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
