| 摘要 | 第1-3页 |
| 前言 | 第3-4页 |
| 1 材料与方法 | 第4-10页 |
| ·试验材料 | 第4-5页 |
| ·菌种和细胞株 | 第4页 |
| ·基因和质粒载体 | 第4页 |
| ·主要试剂材料 | 第4页 |
| ·主要仪器设备 | 第4-5页 |
| ·主要试剂的配制 | 第5页 |
| ·人溶菌酶基因的乳腺特异表达载体的构建 | 第5-6页 |
| ·共转染山羊的胎儿成纤维细胞以及抗性克隆的筛选鉴定 | 第6页 |
| ·外源基因的整合鉴定 | 第6-7页 |
| ·体细胞核移植 | 第7-8页 |
| ·卵母细胞制备与受体羊的同步 | 第7页 |
| ·供核细胞的饥饿处理 | 第7页 |
| ·重构卵的制备与激活 | 第7-8页 |
| ·重构卵的包埋、回收与发育胚胎的移植 | 第8页 |
| ·转基因山羊的诱导泌乳和重组人溶菌酶的表达检测 | 第8页 |
| ·重组人溶菌酶的纯化 | 第8-9页 |
| ·溶菌酶的活性检测 | 第9页 |
| ·重组人溶菌酶的N-端氨基酸测序 | 第9页 |
| ·其他未述及的方法均参照参照《分子克隆试验指南》 | 第9-10页 |
| 2 结果 | 第10-20页 |
| ·人溶菌酶基因的乳腺特异表达载体的获得 | 第10-11页 |
| ·体细胞克隆用转基因单克隆细胞的获得 | 第11页 |
| ·转基因克隆羊的获得 | 第11-13页 |
| ·转基因山羊乳汁中重组人溶菌酶的表达检测 | 第13-16页 |
| ·转基因山羊乳汁中重组人溶菌酶的纯化与性质测定 | 第16-20页 |
| 3 讨论 | 第20-25页 |
| ·转基因家畜的乳腺是廉价大量生产重人溶菌酶的理想场所 | 第20-22页 |
| ·体细胞遗传修饰结合核移植技术是制备转基因家畜的高效方法 | 第22-25页 |
| 4 结论 | 第25-26页 |
| 致谢 | 第26页 |
