第一节 文献综述 | 第1-22页 |
一 植物病毒沉默载体 | 第9-16页 |
1 各种不同植物病毒沉默载体的构建 | 第9-12页 |
2 VIGS的本质 | 第12-14页 |
3 植物病毒沉默载体的应用 | 第14页 |
4 植物病毒沉默载体的优势 | 第14-15页 |
5 植物病毒沉默载体的前景 | 第15-16页 |
二 烟草花叶病毒与寄主互作相关研究 | 第16-22页 |
1 TMV的基因组结构 | 第16页 |
2 TMV的侵染 | 第16页 |
3 TMV与寄主因子的互作 | 第16-18页 |
4 寄主与TMV的防御和反防御 | 第18-19页 |
5 与病毒侵染过程相关的寄主因子 | 第19-22页 |
第二节 材料与方法 | 第22-31页 |
1 菌株和载体 | 第22页 |
2 主要试剂 | 第22页 |
3 主要仪器 | 第22页 |
4 RNA提取(Trizol法) | 第22-23页 |
5 mRNA的RT-PCR | 第23-24页 |
6 割胶回收 | 第24-25页 |
7 连接 | 第25页 |
8 感受态细胞制备方法(CaCl_2制备法) | 第25页 |
9 转化 | 第25-26页 |
10 质粒提取 | 第26页 |
11 酶切分析 | 第26-27页 |
12 电击转化 | 第27页 |
13 CTAB法小量提取基因组DNA | 第27-28页 |
14 半定量RT-PCR分析 | 第28页 |
15 Northern杂交分析 | 第28-31页 |
第三节 本氏烟和番茄中TOM类基因的克隆和功能初步分析 | 第31-39页 |
1 材料与方法 | 第31-32页 |
·植物总RNA的提取 | 第31页 |
·设计简并引物及RT-PCR扩增目的片段 | 第31-32页 |
·沉默载体构建。 | 第32页 |
·GFP荧光检测与成像 | 第32页 |
2 结果 | 第32-38页 |
·NbTOM1和TTOM1的克隆及序列分析 | 第32-36页 |
·NbTOM1功能的初步鉴定 | 第36-38页 |
3 讨论 | 第38页 |
4 小结 | 第38-39页 |
参考文献 | 第39-46页 |
附录A:常用试剂及仪器 | 第46-48页 |
附录B:常用缓冲液及培养基配方 | 第48-51页 |
附录C:英文缩写词表 | 第51-52页 |