| 摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 一、前言 | 第8-20页 |
| 1.植酸酶的概述 | 第8-10页 |
| 2.植酸酶基因工程进展 | 第10-12页 |
| 3.毕赤酵母表达系统研究进展 | 第12-16页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优点 | 第12页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的表达载体 | 第12-13页 |
| ·外源基因转化巴斯德毕赤酵母表达系统方式 | 第13页 |
| ·影响外源基因在酵母中表达的因素 | 第13-16页 |
| 4.植酸酶表达中存在的问题 | 第16页 |
| 5.提高植酸酶表达量的研究进展 | 第16页 |
| 6.信号肽的作用 | 第16-17页 |
| 7.信号肽国内外研究进展 | 第17-19页 |
| 8.本研究的前期工作基础 | 第19-20页 |
| 9.毕赤酵母表达载体信号肽改造目的和意义 | 第20页 |
| 二 试验材料 | 第20-23页 |
| 1.菌株及载体 | 第20-22页 |
| 2.主要仪器 | 第22页 |
| 3.分子生物学试剂 | 第22页 |
| 4.主要药品 | 第22页 |
| 5.培养基 | 第22-23页 |
| 6.酶活测定药品及试剂 | 第23页 |
| 三.实验方法 | 第23-31页 |
| 1.表达载体信号肽的改造 | 第23-25页 |
| 2.酵母表达载体pPIC9k-MS的构建 | 第25-26页 |
| 3.酵母表达质粒pPIC9k-MS-phyA~m和pPIC9k-MS-phyA~(m-4)的构建 | 第26-27页 |
| ·酵母表达质粒pPIC9k-MS-phyA~m的构建 | 第26页 |
| ·酵母表达质粒pPIC9k-MS-phyA~(M-4)的构建 | 第26-27页 |
| 4.重组质粒pPIC9k-MS-phyA~m和pPIC9k-MS-phyA~(m-4)的电击转化及转化子的筛选 | 第27-28页 |
| 5.转化子的诱导表达和酶活性的测定 | 第28-30页 |
| 6.转化子的PCR鉴定 | 第30页 |
| 7.表达产物的SDS-PAGE分析 | 第30页 |
| 8.重组酵母的遗传稳定性测定 | 第30-31页 |
| 四.结果 | 第31-39页 |
| 1.表达载体信号肽的改造 | 第31页 |
| 2.酵母表达载体pPIC9k-MS的构建 | 第31-32页 |
| 3.酵母表达质粒pPIC9k-MS-phyA~m、pPIC9k-MS-phyA~(m-4)的构建 | 第32-33页 |
| ·酵母表达质粒pPIC9k-MS-phyA~m的构建 | 第32-33页 |
| ·酵母表达质粒pPIC9k-MS-phyA~(M-4)的构建 | 第33页 |
| 4.重组质粒pPIC9k-MS-phyA~m和pPIC9k-MS-phyA~(m-4)的电击转化及转化子的筛选 | 第33-36页 |
| 5.转化子的诱导表达和酶活性的测定 | 第36-37页 |
| ·将pPIC9k-MS-phyA~m的转化子的酶活性的测定 | 第36页 |
| ·将pPIC9k-MS-phyA~(m-4)的转化子的酶活性的测定 | 第36-37页 |
| 6.转化子的PCR鉴定 | 第37-38页 |
| 7.表达产物的SDS-PAGE分析 | 第38页 |
| 8.重组酵母的遗传稳定性测定 | 第38-39页 |
| 六、讨论 | 第39-42页 |
| 1.巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第39页 |
| 2.表达载体信号肽密码子改造的作用与基因表达的关系 | 第39-41页 |
| 3.进一步提高phyA基因在毕赤酵母中活性及其表达量的措施 | 第41-42页 |
| 七、结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-49页 |
| 致谢 | 第49-51页 |
| 在读期间发表的论文 | 第51页 |
