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核孔蛋白p62促进非受体型酪氨酸激酶c-Ab1进入细胞核

缩略词表第1-6页
摘要第6-7页
ABSTRACT第7-9页
前言第9-18页
 一.非受体酪氨酸激酶c-Abl的结构与功能第9-13页
  1.c-Abl的结构特点第9-10页
   ·c-Abl的N端第9-10页
   ·c-Abl的C端第10页
  2.c-Abl激酶活性的调控第10-11页
  3.c-Abl的亚细胞定位与其功能的关系第11-13页
   ·c-Abl在细胞核中的作用第11-12页
   ·c-Abl在细胞质中的作用第12-13页
   ·c-Abl的细胞核-细胞质穿梭过程第13页
 二.大分子物质的跨核膜转运的途径及其调控第13-15页
 三.筛选相互作用蛋白的重要工具——酵母双杂交系统第15-18页
材料与方法第18-31页
 1.酵母双杂交用菌株、质粒、培养基及其他试剂第18页
 2.酵母双杂交方法第18-22页
   ·酵母感受态细胞的制备第18-19页
   ·小规模酵母转化第19页
   ·β-gal分析第19-20页
   ·酵母(BD质粒)感受态的制备第20页
   ·大规模转化文库质粒DNA第20-21页
   ·阳性克隆的筛选及酵母质粒的提取第21页
   ·AD质粒的PCR鉴定、测序及转化第21-22页
   ·阳性AD质粒的再次验证第22页
 3.其它实验用菌株、细胞株及质粒第22页
 4.分子生物学工具酶第22页
 5.载体构建、引物合成及测序第22-25页
   ·Flag-p62及其突变体的构建第23页
   ·Myc-p62及其突变体的构建第23-25页
   ·GST-p62及其突变体的构建第25页
   ·DsRed-p62表达载体的构建第25页
 6.谷胱甘肽S转移酶(glutathion S-transferase,GST)融合蛋白的制备第25-26页
 7.转染质粒的制备第26页
 8.细胞培养与转染第26-27页
 9.免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)与免疫印迹(Immunoblot,IB)第27-29页
 10.体外激酶分析实验第29页
 11.细胞核、细胞质蛋白的分离第29-30页
 12.活体细胞的荧光共聚焦显微镜观察第30-31页
结果第31-40页
 1.通过酵母双杂交实验获得与c-Abl相互作用的蛋白:核孔蛋白p62第31-32页
 2.p62在体内外均与c-Abl相互作用第32-35页
 3.p62可被c-Abl磷酸化第35-37页
 4.p62可促进c-Abl进入细胞核第37-38页
 5.DNA损伤处理后p62与c-Abl之间相互作用的变化第38-40页
讨论第40-47页
 1.通过酵母双杂交实验获得可能参与c-Abl核-质穿梭过程的相互作用蛋白:核孔蛋白p62第40-41页
 2.非受体酪氨酸激酶c-Abl与核孔蛋白p62之间的相互作用第41-42页
 3.c-Abl对p62的磷酸化作用第42-43页
 4.p62对c-Abl进入细胞核的影响第43-45页
 5.DNA损伤对c-Abl和p62相互作用的影响第45-46页
 6.小结第46-47页
参考文献第47-51页
附录第51-53页
致谢第53-56页
文献综述第56-65页
已接受论文第65-80页
博士期间已发表论文目录第80页

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