| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-14页 |
| 文献综述 | 第14-39页 |
| 第一部分 番木瓜瓜乳蛋白及其相关酶类 | 第14-28页 |
| 1 概述 | 第14-15页 |
| 2 番木瓜的保健预防作用 | 第15-16页 |
| ·增强机体免疫力 | 第15页 |
| ·抗氧化、清除自由基作用 | 第15页 |
| ·抗菌、抗病原体作用 | 第15-16页 |
| ·营养补充作用 | 第16页 |
| 3 番木瓜瓜乳蛋白及其相关酶类 | 第16-26页 |
| ·木瓜的主要化学成分 | 第16页 |
| ·番木瓜瓜乳蛋白酶类 | 第16-26页 |
| ·木瓜蛋白酶 | 第18-20页 |
| ·木瓜凝乳蛋白酶 | 第20-23页 |
| ·proteinase omega | 第23-24页 |
| ·甘氨酰内切酶 | 第24-25页 |
| ·其他酶类 | 第25-26页 |
| 4 番木瓜做为生物反应器的研究 | 第26-28页 |
| ·细胞培养获得蛋白酶类 | 第26-27页 |
| ·转基因疫苗的开发 | 第27-28页 |
| 第二部分 启动子文献综述 | 第28-38页 |
| 1 启动子的概念、结构及其分类 | 第28-29页 |
| ·启动子的概念 | 第28页 |
| ·真核生物启动子的结构模型 | 第28-29页 |
| ·启动子的分类 | 第29页 |
| 2 启动子克隆的意义及其克隆方法 | 第29-31页 |
| ·启动子克隆的意义 | 第29-30页 |
| ·启动子克隆的方法 | 第30-31页 |
| ·利用启动子探针质粒载体筛选启动子 | 第30页 |
| ·利用PCR技术克隆启动子 | 第30-31页 |
| 3 组织特异表达启动子 | 第31-38页 |
| ·在营养器官中表达的组织特异型启动子 | 第32-35页 |
| ·叶片特异表达启动子 | 第32页 |
| ·韧皮部特异表达启动子 | 第32-33页 |
| ·维管束特异表达启动子 | 第33-34页 |
| ·块茎专一表达启动子 | 第34-35页 |
| ·在生殖器官中表达的组织特异型启动子 | 第35-38页 |
| ·花粉组织特异性启动子 | 第35-36页 |
| ·果实特异表达启动子 | 第36页 |
| ·花器官特异表达启动子 | 第36-37页 |
| ·种子特异表达启动子 | 第37-38页 |
| 第三部分 番木瓜基因调控研究 | 第38-39页 |
| 本研究的目的意义 | 第39-43页 |
| 本研究的技术路线 | 第43-89页 |
| 1 材料和方法 | 第44-58页 |
| ·材料与试剂 | 第44-45页 |
| ·植物材料和菌种 | 第44页 |
| ·试剂和药品 | 第44页 |
| ·主要仪器 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-51页 |
| ·总DNA的提取、PCR引物的设计与合成 | 第45页 |
| ·引物的设计与合成 | 第45-46页 |
| ·基因组的酶切 | 第46-47页 |
| ·与接头连接 | 第47页 |
| ·PCR反应 | 第47-48页 |
| ·PCR产物的回收 | 第48页 |
| ·T-载体克隆与鉴定 | 第48-49页 |
| ·宿主菌E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第49页 |
| ·连接产物的转化 | 第49-50页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组质粒的提取 | 第50页 |
| ·质粒的纯化 | 第50-51页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第51页 |
| ·序列的同源性搜索和顺式作用元件分析 | 第51-52页 |
| ·启动子缺失表达载体的构建 | 第52-54页 |
| ·Proteinase omega基因的启动子缺失表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·启动子缺失片段的获得 | 第52-53页 |
| ·启动子系列缺失产物与载体pCAMBIA1301的连接 | 第53页 |
| ·Chymopapain基因启动子缺失载体构建 | 第53-54页 |
| ·嵌合载体在番木瓜瓜乳中的瞬时表达研究 | 第54页 |
| ·质粒的大量提取和纯化 | 第54页 |
| ·瓜乳的收集与处理 | 第54页 |
| ·嵌合载体在瓜乳中的瞬时表达研究 | 第54页 |
| ·基因枪介导的遗传转化 | 第54-55页 |
| ·材料的处理 | 第54页 |
| ·微弹的制备 | 第54-55页 |
| ·装弹轰击 | 第55页 |
| ·GUS组织化学染色 | 第55页 |
| ·重组农杆菌工程菌株的获得 | 第55-56页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第55-56页 |
| ·农杆菌GV3101的转化(电激转化法) | 第56页 |
| ·筛选与鉴定 | 第56页 |
| ·农杆菌介导的果实瞬时表达 | 第56-57页 |
| ·农杆菌介导的烟草转化 | 第57-58页 |
| ·烟草基因组DNA的制备 | 第57页 |
| ·再生植株的PCR检测及GUS组织化学染色 | 第57-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-81页 |
| ·基因组的酶切及启动子片段的克隆 | 第58-73页 |
| ·基因组的酶切 | 第58-59页 |
| ·番木瓜proteinase omega基因启动子的克隆 | 第59-66页 |
| ·启动子序列分析 | 第64-65页 |
| ·转录起始位点的预测和启动子元件的预测 | 第65-66页 |
| ·番木瓜chymopapain基因启动子的克隆与分析 | 第66-68页 |
| ·番木瓜papain基因启动子的克隆与分析 | 第68-71页 |
| ·宝生物4B-300测序结果 | 第71页 |
| ·克隆的两个启动子序列的同源性比对 | 第71-73页 |
| ·表达载体的构建 | 第73-81页 |
| ·Proteinase omega基因的启动子缺失载体的构建 | 第73-75页 |
| ·番木瓜chymopapain基因启动子缺失载体的构建 | 第75页 |
| ·嵌合载体在番木瓜瓜乳中的瞬时表达研究 | 第75-76页 |
| ·不同长度的启动子驱动GUS基因在番木瓜叶片中的瞬时表达 | 第76-77页 |
| ·农杆菌转化番木瓜果实研究 | 第77-79页 |
| ·重组农杆菌的鉴定 | 第77-78页 |
| ·农杆菌介导的GUS基因在番木瓜瓜乳和果实中的瞬时表达 | 第78-79页 |
| ·乳管特异表达启动子嵌合载体在烟草中的稳定表达 | 第79-81页 |
| ·转化烟草叶盘再生成株 | 第79-80页 |
| ·再生植株的PCR分析 | 第80页 |
| ·不同长度的启动子驱动GUS基因在烟草叶片中的稳定表达 | 第80-81页 |
| ·启动子驱动GUS基因在烟草叶片中的伤诱导表达 | 第81页 |
| 3 讨论 | 第81-87页 |
| ·启动子的克隆与功能鉴定 | 第81-82页 |
| ·序列的生物信息学分析 | 第82-84页 |
| ·载体的构建策略 | 第84-85页 |
| ·关于番木瓜的乳管 | 第85-86页 |
| ·番木瓜作为生物反应器的优势 | 第86页 |
| ·下一步工作计划 | 第86-87页 |
| 4 结论 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-100页 |
| 论文图版 | 第100-105页 |
| 附录 | 第105-107页 |
| 致谢 | 第107页 |
