| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-23页 |
| ·泰勒虫的分类 | 第13页 |
| ·泰勒虫的生活史 | 第13-14页 |
| ·病理学和致病机制 | 第14页 |
| ·绵羊和山羊的主要泰勒虫虫种 | 第14-19页 |
| ·莱氏泰勒虫 (T. lestoquardi Morel and Uilenberg 1981) | 第14-15页 |
| ·吕氏泰勒虫和尤氏泰勒虫 (Theileria luwenshuni and Theileria uilenbergi 2002) | 第15-19页 |
| ·泰勒虫抗原性基因的研究进展 | 第19-21页 |
| ·SPAG-1 (Theileria annulata sporozoite surface antigen)与 P67 (67-kilodalton stage-specific surface antigen of Theileria parva) | 第19-20页 |
| ·PIM (polymorphic immunodominant molecule) of Theileria parva | 第20页 |
| ·TaSP (polymorphic Theileria annulata surface protein) | 第20-21页 |
| ·TaSE (Theileria annulata parasite protein secreted into the host cell cytoplasm) | 第21页 |
| ·TaD (A putative Theileria annulata membrane protein) | 第21页 |
| ·研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 尤氏泰勒虫 TU88 基因的克隆、表达及反应原性分析 | 第23-39页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·基因与载体 | 第23页 |
| ·主要生化试剂 | 第23页 |
| ·实验动物 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-28页 |
| ·Tu88 基因的生物信息学分析 | 第24页 |
| ·引物的设计与合成 | 第24-25页 |
| ·重组表达载体 pET30(a)-Tu88 的构建及鉴定 | 第25-26页 |
| ·重组蛋白 Tu88 的诱导表达 | 第26页 |
| ·Western blot 检测重组蛋白的表达 | 第26-27页 |
| ·表达条件的优化 | 第27页 |
| ·重组蛋白的可溶性分析 | 第27页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第27-28页 |
| ·重组蛋白反应原性的检测 | 第28页 |
| ·基于 Tu88 蛋白间接 ELISA 方法的建立及初步应用 | 第28页 |
| ·结果 | 第28-37页 |
| ·Tu88 基因序列的生物信息学分析 | 第28-30页 |
| ·目的基因的克隆 | 第30页 |
| ·重组阳性质粒的鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组表达菌的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·重组蛋白的 Western blot 鉴定 | 第32页 |
| ·重组蛋白表达的优化及可溶性分析 | 第32-34页 |
| ·Tu88 蛋白的纯化 | 第34页 |
| ·重组蛋白反应原性的检测 | 第34-36页 |
| ·间接 ELISA 的建立及初步应用 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 尤氏泰勒虫裂殖子 TU88 基因特征的研究 | 第39-48页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·基因与质粒 | 第39页 |
| ·主要仪器设备 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39-40页 |
| ·方法 | 第40-44页 |
| ·引物的设计与合成 | 第40页 |
| ·探针的标记 | 第40页 |
| ·探针标记效率的检测 | 第40-41页 |
| ·尤氏泰勒虫基因组 DNA 含量和纯度的测定 | 第41页 |
| ·基因组的酶切及电泳 | 第41-42页 |
| ·转膜 | 第42页 |
| ·固定 | 第42-43页 |
| ·预杂交与杂交 | 第43页 |
| ·曝光前的反应 | 第43页 |
| ·曝光 | 第43页 |
| ·探针的剥离 | 第43-44页 |
| ·结果 | 第44-47页 |
| ·目的片段的扩增及回收 | 第44页 |
| ·探针标记效率的检测 | 第44-45页 |
| ·尤氏泰勒虫基因组 DNA 的定量 | 第45页 |
| ·限制性内切酶的选择 | 第45-46页 |
| ·电泳 | 第46页 |
| ·Tu88 基因的 Southern 杂交检测结果 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 尤氏泰勒虫 TU88 蛋白的真核表达及亚细胞定位初步分析 | 第48-66页 |
| ·材料和方法 | 第48-56页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48-49页 |
| ·试剂的配制 | 第49-50页 |
| ·盖玻片的准备 | 第50页 |
| ·Tu88 克隆载体的构建 | 第50-51页 |
| ·真核表达载体的构建与阳性质粒的提取 | 第51-52页 |
| ·细胞的复苏、培养与冻存 | 第52-53页 |
| ·培养基中 G418 筛选浓度的确定 | 第53页 |
| ·CHO 细胞的转染 | 第53-54页 |
| ·兔抗 rTu88 蛋白多抗的制备 | 第54页 |
| ·转染细胞表达 Tu88 蛋白的 western blot 鉴定 | 第54-55页 |
| ·表达 Tu88 蛋白 CHO 细胞的单克隆 | 第55-56页 |
| ·目的蛋白的亚细胞定位 | 第56页 |
| ·结果 | 第56-64页 |
| ·Tu88 基因的 PCR 扩增 | 第56页 |
| ·克隆载体 pGEM-TEasy-Tu88 的菌落 PCR 鉴定 | 第56-57页 |
| ·pGEM-TEasy-Tu88 的测序鉴定 | 第57页 |
| ·真核表达载体 pEGFP-N1-Tu88 的 PCR 鉴定 | 第57-58页 |
| ·pEGFP-N1-Tu88 的测序鉴定 | 第58页 |
| ·重组表达蛋白的性质分析 | 第58页 |
| ·真核表达质粒 pEGFP-N1-Tu88 小量制备的浓度和 OD 值 | 第58-59页 |
| ·CHO-K1 细胞的培养 | 第59页 |
| ·筛选培养基中 G418 浓度的选择 | 第59页 |
| ·转染时质粒 DNA 与脂质体 LipofectamineTM2000 比例的优化 | 第59-61页 |
| ·兔抗 rTu88 多抗的制备 | 第61页 |
| ·Western blot 检测目的蛋白的表达 | 第61-62页 |
| ·目的蛋白在 CHO 细胞中表达的规律 | 第62页 |
| ·重组质粒转染后稳定细胞系的建立 | 第62-63页 |
| ·Tu88 蛋白的细胞定位特征 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| 第五章 结论 | 第66-68页 |
| ·TU88 的生物信息学分析 | 第66页 |
| ·TU88 基因的原核表达和反应原性的鉴定 | 第66页 |
| ·TU88 基因拷贝数的分析 | 第66页 |
| ·TU88 基因的真核表达和在异源性真核表达体系-CHO 细胞中的亚细胞定位 | 第66-67页 |
| ·TU88 基因的初步应用 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 作者简历 | 第76页 |
