| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-16页 |
| 第一章 蝎毒素及离子通道研究进展简介 | 第16-31页 |
| 1 蝎毒素的组成成分及其性质 | 第17-23页 |
| ·钾离子通道蝎毒素 | 第18-20页 |
| ·钠离子通道蝎毒素 | 第20-21页 |
| ·氯离子通道蝎毒素 | 第21-22页 |
| ·钙离子通道蝎毒素 | 第22-23页 |
| 2 蝎毒素研究进展 | 第23-25页 |
| ·新型蝎毒素的分离鉴定 | 第23-24页 |
| ·蝎毒素进化研究 | 第24页 |
| ·蝎毒素结构与功能的相互关系的研究 | 第24-25页 |
| ·蝎毒素与离子通道受体相互关系研究 | 第25页 |
| 3 钾离子通道研究简介 | 第25-31页 |
| ·钾离子通道种类 | 第26-29页 |
| ·膜钾离子通道的基本结构 | 第29-31页 |
| 第二章 东亚钳蝎蝎毒素基因BmTxKS4的cDNA克隆及其序列分析 | 第31-41页 |
| 0 引言 | 第31-32页 |
| 1 材料和方法 | 第32-35页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-35页 |
| ·cDNA文库的PCR初步筛选 | 第33页 |
| ·BmTxKS4全长cDNA的分离 | 第33页 |
| ·蝎毒素BmTxKS4信号肽切割位点预测 | 第33页 |
| ·蝎毒素BmTxKS4成熟肽分子量及等电点计算 | 第33页 |
| ·蝎毒素BmTxKS4成熟肽同源性比较 | 第33-34页 |
| ·蝎毒素BmTxKS4成熟肽二级结构 | 第34-35页 |
| 2 结果和讨论 | 第35-41页 |
| ·cDNA文库的初步筛选 | 第35页 |
| ·BmTxKS4 cDNA及其编码的氨基酸序列 | 第35-37页 |
| ·蝎毒素BmTxKS4信号肽切割位点预测 | 第37-38页 |
| ·蝎毒素BmTxKS4成熟肽等电点及分子量计算 | 第38-39页 |
| ·蝎毒素BmTxKS4成熟肽同源性比较 | 第39页 |
| ·蝎毒素BmTxKS4成熟肽二级结构 | 第39-41页 |
| 第三章 东亚钳蝎蝎毒素BmTxKS4基因组克隆及其基因组织结构分析 | 第41-50页 |
| 0 引言 | 第41-42页 |
| 1 材料和方法 | 第42-45页 |
| ·材料与试剂 | 第42页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·试剂 | 第42页 |
| ·其它试剂 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-45页 |
| ·设计PCR引物 | 第43页 |
| ·东亚钳蝎基因组DNA的制备 | 第43-44页 |
| ·PCR条件 | 第44页 |
| ·PCR产物的回收 | 第44页 |
| ·DH5a感受态细胞的制备 | 第44页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第44-45页 |
| ·内含子序列的编辑和分析 | 第45页 |
| 2 结果与讨论 | 第45-48页 |
| ·蝎子基因组总DNA | 第45页 |
| ·PCR反应电泳检测 | 第45-46页 |
| ·基因组克隆测序及其序列结构 | 第46-48页 |
| ·BmTxKS4序列结构比较结构 | 第48页 |
| 3 结论 | 第48-50页 |
| 第四章 东亚钳蝎毒素基因BmTxKS4的原核表达与纯化 | 第50-66页 |
| 0 引言 | 第50-52页 |
| 1 材料和方法 | 第52-58页 |
| ·材料 | 第52-54页 |
| ·载体与菌株 | 第52页 |
| ·试剂 | 第52-53页 |
| ·其它所需试剂 | 第53页 |
| ·小量碱法制备质粒所用溶液 | 第53页 |
| ·PCR引物 | 第53页 |
| ·pGEX-5x-1图谱 | 第53-54页 |
| ·方法 | 第54-58页 |
| ·质粒的小量制备 | 第54-55页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第55-56页 |
| ·PCR反应 | 第55页 |
| ·酶切反应 | 第55页 |
| ·连接反应 | 第55-56页 |
| ·连接产物电击转化E.coli DH_(5α) | 第56页 |
| ·重组子的筛选与鉴定 | 第56页 |
| ·GSH亲和层析胶的制备 | 第56-57页 |
| ·融合蛋白GST-BmTxKS4的诱导表达 | 第57页 |
| ·重组BmTxKS4的纯化 | 第57-58页 |
| ·破菌 | 第57页 |
| ·亲和层析 | 第57页 |
| ·Sephadex分子筛凝胶层析 | 第57-58页 |
| 2 结果 | 第58-62页 |
| ·PCR方法获取含有BmTxKS4 cDNA的目的片段 | 第58页 |
| ·阳性克隆的BamHI、XhoI双酶切鉴定 | 第58-59页 |
| ·阳性克隆子的测序 | 第59-60页 |
| ·重组GFP-BmTxKS4融合蛋白的诱导表达 | 第60-62页 |
| ·重组BmTxKS4的纯化 | 第62页 |
| 3 讨论 | 第62-66页 |
| 第五章 重组东亚钳蝎毒肽BmTxKS4对兔心室肌细胞和大鼠海马神经元细胞膜上钾离子通道作用的研究 | 第66-83页 |
| 0 引言 | 第66-71页 |
| ·膜片钳记录的两个基本条件 | 第66-67页 |
| ·膜片钳技术在离子通道研究中的主要作用 | 第67页 |
| ·膜片钳技术的经典方法 | 第67-71页 |
| 1 材料和方法 | 第71-75页 |
| ·材料 | 第71-72页 |
| ·动物与试剂 | 第71页 |
| ·细胞培养液成分 | 第71-72页 |
| ·方法 | 第72-75页 |
| ·心室肌细胞的急性分离 | 第72-73页 |
| ·海马神经元细胞的分离与培养 | 第73-74页 |
| ·培养皿的预处理 | 第73页 |
| ·培养方法 | 第73-74页 |
| ·膜片钳全细胞记录 | 第74-75页 |
| ·统计学处理 | 第75页 |
| 2 结果 | 第75-81页 |
| ·重组BmTxKS4对兔心室肌细胞动作电位的影响 | 第75-77页 |
| ·重组BmTxKS4对心室肌细胞钾电流的影响 | 第77-79页 |
| ·重组BmTxKS4对心室肌细胞瞬时外向钾电流(transient outward potassium current，Ito) 的影响 | 第77-78页 |
| ·重组BmTxKS4对心室肌细胞内向整流钾电流(Inward rectifier potassium current，Ik_1)的影响 | 第78-79页 |
| ·重组BmTxKS4对海马神经元细胞钾电流的影响 | 第79-81页 |
| ·重组BmTxKS4对神经元细胞总钾电流(total potassium current，TK)的影响 | 第79-80页 |
| ·重组BmTxKS4对神经元细胞延迟整流钾电流(delayed rectifier potassium current，I_k)的影响 | 第80-81页 |
| 3 讨论 | 第81-83页 |
| ·重组BmTxKS4对神经元和心室肌细胞不同的钾离子通道亲和力不同 | 第81-82页 |
| ·重组BmTxKS4的药用价值 | 第82-83页 |
| 第六章 重组东亚钳蝎毒肽BmTxKS4对肿瘤细胞生长的影响和动物毒性的初步检测 | 第83-89页 |
| 0 引言 | 第83-84页 |
| 1 材料和方法 | 第84-86页 |
| ·材料 | 第84-85页 |
| ·方法 | 第85-86页 |
| ·Hela细胞培养 | 第85页 |
| ·酶标仪检测rBmTxKS4对Hela细胞生长影响的实验方法 | 第85-86页 |
| ·rBmTxKS4小白鼠毒性实验 | 第86页 |
| ·数据处理及统计分析 | 第86页 |
| 2 结果和讨论 | 第86-89页 |
| ·rBmTxKS4对肿瘤细胞生长的影响 | 第86-88页 |
| ·rBmTxKS4对kunming小白鼠的毒性测定 | 第88-89页 |
| 第七章 东亚钳蝎蝎毒素BmKBT基因组序列的克隆及其分析 | 第89-97页 |
| 0 引言 | 第89-90页 |
| 1 材料和方法 | 第90-91页 |
| ·东亚钳蝎基因组DNA的制备 | 第90页 |
| ·PCR反应 | 第90-91页 |
| ·PCR产物的克隆与序列测定 | 第91页 |
| ·蝎毒素基因内含子序列的编辑与分析 | 第91页 |
| 2 结果 | 第91-94页 |
| ·PCR反应结果 | 第91-92页 |
| ·BmKBT内含子序列测定及其基因组织结构分析 | 第92页 |
| ·蝎毒素基因内含子结构比较 | 第92-94页 |
| 3 讨论 | 第94-97页 |
| 参考文献 | 第97-107页 |
| 本研究工作的主要创新点 | 第107-108页 |
| 博士期间发表的论文 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109-111页 |
