摘要 | 第1-11页 |
Abstract | 第11-15页 |
英文缩略词 | 第15-17页 |
第一章 文献综述 | 第17-41页 |
1 果实中糖的积累与糖代谢酶的研究 | 第17-23页 |
2 转化酶的结构、功能及在植物发育和蔗糖积累中的作用 | 第23-28页 |
3 甜瓜果实发育过程中糖分转化与酶活性变化的研究进展和展望 | 第28-33页 |
4 cDNA文库构建方法的进展 | 第33-41页 |
第二章 甜瓜幼果cDNA文库的构建 | 第41-60页 |
1 材料和方法 | 第41-52页 |
·实验材料 | 第41-42页 |
·实验方法 | 第42-52页 |
·甜瓜幼果总RNA的提取 | 第42-43页 |
·cDNA的合成 | 第43-46页 |
·连接 | 第46-47页 |
·包装 | 第47页 |
·文库滴度的测定 | 第47-48页 |
·文库的检测 | 第48页 |
·文库的扩增 | 第48-49页 |
·扩增文库的滴度测定与保存 | 第49页 |
·甜瓜酸性转化酶基因的初步筛选 | 第49-52页 |
2 结果与分析 | 第52-57页 |
·总RNA的提取结果 | 第52页 |
·cDNA的合成 | 第52-53页 |
·双链cDNA的分级分离 | 第53页 |
·文库的滴度 | 第53-54页 |
·文库的检测结果 | 第54-56页 |
·甜瓜酸性转化酶基因的初步筛选结果 | 第56-57页 |
3 讨论 | 第57-60页 |
·提高RNA质量的措施 | 第57-58页 |
·关于全长cDNA的克隆 | 第58页 |
·SMART技术在甜瓜上的应用 | 第58-60页 |
第三章 甜瓜果实酸性转化酶基因的克隆及反义表达载体的构建 | 第60-83页 |
1 材料和方法 | 第60-71页 |
·实验材料 | 第60-62页 |
·实验方法 | 第62-71页 |
·甜瓜果实总RNA的提取 | 第62页 |
·甜瓜果实酸性转化酶基因cDNA片段的克隆 | 第62-65页 |
·克隆cDNA片段的测序及序列分析 | 第65页 |
·甜瓜果实酸性转化酶基因反义表达载体的构建 | 第65-71页 |
2 结果与分析 | 第71-80页 |
·总RNA的提取结果 | 第71页 |
·甜瓜果实酸性转化酶cDNA片段的克隆 | 第71-72页 |
·克隆cDNA片段的测序及序列分析 | 第72-78页 |
·pROK2载体的构建结果 | 第78-79页 |
·甜瓜果实酸性转化酶基因反义表达载体Anti-MAl1的构建结果 | 第79页 |
·甜瓜果实酸性转化酶基因反义表达载体Anti-MAl2的构建结果 | 第79-80页 |
3 讨论 | 第80-83页 |
·关于植物材料和总RNA的提取 | 第80-81页 |
·关于酶切与连接 | 第81页 |
·关于MAI cDNA片段的序列分析结果及其利用 | 第81-82页 |
·关于反义技术在植物基因工程中的应用 | 第82-83页 |
第四章 遗传转化 | 第83-91页 |
1 材料与方法 | 第83-86页 |
·实验材料 | 第83页 |
·实验方法 | 第83-86页 |
·根癌农杆菌介导的Anti-MAll基因转化烟草的实验 | 第83-86页 |
·甜瓜子叶再生系统的建立 | 第86页 |
·农杆菌介导的Anti-MAl1及Anti-MAI2对甜瓜的转化 | 第86页 |
2 结果与讨论 | 第86-91页 |
·氯化钙法将Anti-MAl1和Anti-MA12转入根癌农杆菌 | 第86-87页 |
·转基因烟草植株的PCR和PCR-Southern检测 | 第87页 |
·甜瓜子叶再生植株的获得 | 第87-88页 |
·不同变种甜瓜在不同处理的培养基中的分化结果 | 第88-89页 |
·农杆菌介导法转化甜瓜的初步结果 | 第89页 |
·关于标记基因的切除 | 第89-90页 |
·继续研究的设想 | 第90-91页 |
结论 | 第91-92页 |
参考文献 | 第92-105页 |
致谢 | 第105-106页 |
攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第106页 |