| 摘要 | 第1-9页 |
| 1 前言 | 第9-20页 |
| 2 研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 3 材料与方法 | 第21-32页 |
| ·试验一:猪骨髓抗菌肽PR-39基因和看家基因β-actin克隆及序列分析 | 第21-26页 |
| ·试验材料 | 第21-23页 |
| ·试验方法 | 第23-26页 |
| ·猪骨髓总RNA的提取 | 第23页 |
| ·甲醛变性电泳 | 第23页 |
| ·RT-PCR反应 | 第23-24页 |
| ·PCR产物电泳 | 第24页 |
| ·PCR产物割胶回收(QIA quick 试剂盒) | 第24页 |
| ·PCR回收产物与pGEM-T easy载体连接 | 第24-25页 |
| ·转化 | 第25页 |
| ·重组克隆筛选 | 第25-26页 |
| ·PCR鉴定重组克隆 | 第26页 |
| ·重组DNA核苷酸序列测定分析 | 第26页 |
| ·试验二:RT-PCR法评定不同日龄仔猪抗菌肽PR-39 mRNA表达差异 | 第26-29页 |
| 材料和方法 | 第26-29页 |
| ·试验动物 | 第26-27页 |
| ·RNA提取 | 第27页 |
| ·反转录 | 第27页 |
| ·PCR | 第27-29页 |
| 反应体系 | 第27页 |
| 引物的选择和退火温度(T)的确定 | 第27-28页 |
| 最佳MgCl_2浓度的确定 | 第28页 |
| 循环数的确定 | 第28-29页 |
| 引物对之间竟争的控制 | 第29页 |
| ·凝胶电泳 | 第29页 |
| ·电泳图片的获得和定量分析 | 第29页 |
| ·试验三:不同锌源(ZnSO_4、ZnO、纳米ZnO)对断奶仔猪抗菌肽PR-39基因表达影响 | 第29-32页 |
| ·试验材料 | 第29-30页 |
| ·试验动物 | 第30页 |
| ·试验饲粮 | 第30页 |
| ·试验方法 | 第30-32页 |
| 4 试验结果 | 第32-43页 |
| ·PR-39基因克隆及测序结果 | 第32-35页 |
| ·PR-39 RT-PCR产物电泳结果 | 第32页 |
| ·质粒DNA PCR检验结果 | 第32-33页 |
| ·PR-39测序结果 | 第33页 |
| ·β-actin测序结果 | 第33-35页 |
| ·不同日龄仔猪抗菌肽PR-39 mRNA表达差异 | 第35-39页 |
| ·MgCl_2浓度对β-actin和PR-39扩增效率的影响 | 第35页 |
| ·循环数对平台期影响 | 第35-36页 |
| ·引物间扩增竞争对PCR的影响 | 第36-37页 |
| ·对PR-39 mRNA定量的结果 | 第37-39页 |
| ·不同锌源对仔猪生长性能和抗菌肽PR-39 mRNA表达影响结果 | 第39-43页 |
| ·生长速度和饲料利用率 | 第39页 |
| ·循环数对PR-39平台期影响 | 第39-40页 |
| ·饲喂不同锌源的试验猪PR-39 mRNA表达量 | 第40-43页 |
| 5 讨论 | 第43-48页 |
| ·猪骨髓PR-39基因克隆 | 第43页 |
| ·定量RT-PCR法的构建 | 第43-44页 |
| ·仔猪不同日龄PR-39 mRNA表达差异 | 第44-45页 |
| ·不同锌源对断奶仔猪生长性能及抗菌肽PR-39基因表达的影响 | 第45-48页 |
| 6 提示 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-59页 |
