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转Bt抗虫基因植物的酶联免疫检测技术研究

中文摘要第1-7页
前言第7-11页
材料和方法第11-17页
 1. 试验材料第11页
 2. 方法第11-17页
  2.1. Bt晶体杀虫蛋白抗原的提取及影响因素测定第11-13页
   2.1.1. 菌体培养第11页
   2.1.2. 孢晶混合物的提取第11页
   2.1.3. 伴孢晶体的提取第11-12页
   2.1.4. 晶体蛋白含量的测定第12页
    2.1.4.1. 280nm/260nm吸收差法测定第12页
    2.1.4.2. 考马斯亮蓝G-250染色法测定第12页
   2.1.5. 伴孢晶体蛋白成分的电泳分析第12-13页
  2.2. Bt杀虫蛋白抗体的制备第13-14页
   2.2.1. 注射用抗原的制备第13页
   2.2.2. 动物免疫和抗血清制备第13-14页
   2.2.3. 抗血清的分离和效价测定第14页
   2.2.4. 抗血清中免疫球蛋白(IgG)的提取第14页
  2.3. ELISA间接法技术体系建立第14-17页
   2.3.1. 工作溶液第15页
   2.3.2. 棉叶中Bt杀虫蛋白的提取第15页
   2.3.3. ELISA间接法操作程序第15页
   2.3.4. Dot-ELISA的检测操作程序第15-16页
   2.3.5. 特异抗体类型处理对检测OD值的影响第16页
   2.3.6. 检测灵敏度的研究第16页
   2.3.7. 棉花样本Bt杀虫蛋白含量测定第16-17页
结果及分析第17-36页
 1. Bt晶体杀虫蛋白抗原的提取研究第17-22页
  1.1. 培养时间对Bt生长发育的影响第17-18页
  1.2. 培养时间对Bt晶体蛋白产量的影响第18-19页
  1.3. 提取方法对Bt晶体蛋白提取量的影响第19-20页
  1.4. 不同提取处理的蛋白质成分电泳分析第20-22页
 2. 抗体制备及提纯第22-25页
  2.1. 晶体杀虫蛋白含量测定第22-23页
  2.2. 免疫剂量对抗体产生的影响第23-25页
  2.3. 抗血清的IgG提取、含量和特异性测定第25页
 3. 检测方法研究第25-36页
  3.1. 特异抗体类型对光吸收值(OD)的影响第25-27页
  3.2. 检测灵敏度的测定第27-31页
   3.2.1. 用聚苯乙烯板进行ELISA间接法检测抗原的灵敏度第27-29页
    3.2.1.1. 采用IgG-HRP作为酶标抗体的检测灵敏度第27-28页
    3.2.1.2. 采用IgG-AP作为酶标抗体的检测灵敏度第28-29页
   3.2.2. Dot-ELISA间接法检测的灵敏度第29-31页
    3.2.2.1. 采用IgG-HRP酶标抗体的Dot-ELISA检测灵敏度第30页
    3.2.2.2. 采用IgG-AP作为酶标抗体的Dot-ELISA检测灵敏度第30-31页
  3.3. 棉花样本中Bt杀虫蛋白的检测第31-36页
   3.3.1. 用ELISA间接法检测棉花样本中的Bt杀虫晶体蛋白含量第31-34页
    3.3.1.1. 采用IgG-HRP检测棉叶样本的Bt杀虫蛋白含量第31-32页
    3.3.1.2. 采用IgG-AP检测棉叶样本的Bt杀虫蛋白含量第32-34页
   3.3.2 采用Dot-ELISA检测棉花样本中的Bt杀虫晶体蛋白含量第34-36页
结论与讨论第36-38页
致谢第38-39页
英文摘要第39-41页
参考文献第41-43页

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