中文摘要 | 第1-7页 |
前言 | 第7-11页 |
材料和方法 | 第11-17页 |
1. 试验材料 | 第11页 |
2. 方法 | 第11-17页 |
2.1. Bt晶体杀虫蛋白抗原的提取及影响因素测定 | 第11-13页 |
2.1.1. 菌体培养 | 第11页 |
2.1.2. 孢晶混合物的提取 | 第11页 |
2.1.3. 伴孢晶体的提取 | 第11-12页 |
2.1.4. 晶体蛋白含量的测定 | 第12页 |
2.1.4.1. 280nm/260nm吸收差法测定 | 第12页 |
2.1.4.2. 考马斯亮蓝G-250染色法测定 | 第12页 |
2.1.5. 伴孢晶体蛋白成分的电泳分析 | 第12-13页 |
2.2. Bt杀虫蛋白抗体的制备 | 第13-14页 |
2.2.1. 注射用抗原的制备 | 第13页 |
2.2.2. 动物免疫和抗血清制备 | 第13-14页 |
2.2.3. 抗血清的分离和效价测定 | 第14页 |
2.2.4. 抗血清中免疫球蛋白(IgG)的提取 | 第14页 |
2.3. ELISA间接法技术体系建立 | 第14-17页 |
2.3.1. 工作溶液 | 第15页 |
2.3.2. 棉叶中Bt杀虫蛋白的提取 | 第15页 |
2.3.3. ELISA间接法操作程序 | 第15页 |
2.3.4. Dot-ELISA的检测操作程序 | 第15-16页 |
2.3.5. 特异抗体类型处理对检测OD值的影响 | 第16页 |
2.3.6. 检测灵敏度的研究 | 第16页 |
2.3.7. 棉花样本Bt杀虫蛋白含量测定 | 第16-17页 |
结果及分析 | 第17-36页 |
1. Bt晶体杀虫蛋白抗原的提取研究 | 第17-22页 |
1.1. 培养时间对Bt生长发育的影响 | 第17-18页 |
1.2. 培养时间对Bt晶体蛋白产量的影响 | 第18-19页 |
1.3. 提取方法对Bt晶体蛋白提取量的影响 | 第19-20页 |
1.4. 不同提取处理的蛋白质成分电泳分析 | 第20-22页 |
2. 抗体制备及提纯 | 第22-25页 |
2.1. 晶体杀虫蛋白含量测定 | 第22-23页 |
2.2. 免疫剂量对抗体产生的影响 | 第23-25页 |
2.3. 抗血清的IgG提取、含量和特异性测定 | 第25页 |
3. 检测方法研究 | 第25-36页 |
3.1. 特异抗体类型对光吸收值(OD)的影响 | 第25-27页 |
3.2. 检测灵敏度的测定 | 第27-31页 |
3.2.1. 用聚苯乙烯板进行ELISA间接法检测抗原的灵敏度 | 第27-29页 |
3.2.1.1. 采用IgG-HRP作为酶标抗体的检测灵敏度 | 第27-28页 |
3.2.1.2. 采用IgG-AP作为酶标抗体的检测灵敏度 | 第28-29页 |
3.2.2. Dot-ELISA间接法检测的灵敏度 | 第29-31页 |
3.2.2.1. 采用IgG-HRP酶标抗体的Dot-ELISA检测灵敏度 | 第30页 |
3.2.2.2. 采用IgG-AP作为酶标抗体的Dot-ELISA检测灵敏度 | 第30-31页 |
3.3. 棉花样本中Bt杀虫蛋白的检测 | 第31-36页 |
3.3.1. 用ELISA间接法检测棉花样本中的Bt杀虫晶体蛋白含量 | 第31-34页 |
3.3.1.1. 采用IgG-HRP检测棉叶样本的Bt杀虫蛋白含量 | 第31-32页 |
3.3.1.2. 采用IgG-AP检测棉叶样本的Bt杀虫蛋白含量 | 第32-34页 |
3.3.2 采用Dot-ELISA检测棉花样本中的Bt杀虫晶体蛋白含量 | 第34-36页 |
结论与讨论 | 第36-38页 |
致谢 | 第38-39页 |
英文摘要 | 第39-41页 |
参考文献 | 第41-43页 |