| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一部分 引言 | 第13-38页 |
| 第一章 植物对重金属胁迫反应的分子基础 | 第13-23页 |
| 1 植物对重金属的解毒机制 | 第13-18页 |
| ·植物螯合肽 | 第13-16页 |
| ·PC的解毒机制 | 第14页 |
| ·LMW与HMW复合物 | 第14-15页 |
| ·螯合肽合酶基因 | 第15-16页 |
| ·金属硫蛋白和类金属硫蛋白(MT-like) | 第16-17页 |
| ·抗氧化系统及其防御机制 | 第17-18页 |
| 2 植物对重金属反应的信号转导过程 | 第18-19页 |
| 3 重金属污染的植物修复及超富集植物研究 | 第19-21页 |
| ·植物治理 | 第19-20页 |
| ·超富集植物 | 第20-21页 |
| 4 展望 | 第21-23页 |
| 第二章 活性氧及氧化胁迫概述 | 第23-36页 |
| 1 活性氧概述 | 第23-25页 |
| ·活性氧的产生 | 第23-24页 |
| ·光合作用与活性氧产生 | 第23页 |
| ·线粒体与活性氧产生 | 第23-24页 |
| ·活性氧的清除 | 第24-25页 |
| 2 氧化胁迫概述 | 第25-28页 |
| ·质膜损伤 | 第25-26页 |
| ·细胞死亡 | 第26-27页 |
| ·激活防卫反应基因表达 | 第27-28页 |
| 3 ROS信号转导途径 | 第28-34页 |
| ·细菌中ROS信号转导 | 第28-29页 |
| ·酵母中活性氧信号转导途径 | 第29-31页 |
| ·植物中活性氧的信号转导途径 | 第31-32页 |
| ·H_2O_2作为重要的活性氧分子广泛参与植物对胁迫条件的反应 | 第32-34页 |
| 4 拟南芥AtCEO1的研究进展 | 第34-35页 |
| 5 展望 | 第35-36页 |
| 第三章 研究的目的和意义 | 第36-38页 |
| 第二部分 研究报告 | 第38-85页 |
| 第四章 AtCEO2 T-DNA插入突变体的鉴定及表型分析 | 第38-52页 |
| 一、前言 | 第38-39页 |
| 二、材料和方法 | 第39-46页 |
| 1 实验材料 | 第39-41页 |
| ·植物材料 | 第39页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第39页 |
| ·实验仪器 | 第39页 |
| ·PCR引物 | 第39-40页 |
| ·常用培养基和抗生素 | 第40-41页 |
| 2 实验方法 | 第41-46页 |
| ·植物材料种植 | 第41-42页 |
| ·生物信息学分析方法 | 第42页 |
| ·小量基因组DNA提取方法 | 第42页 |
| ·PCR鉴定突变体纯合植株 | 第42-44页 |
| ·总RNA提取(Trizol法) | 第44页 |
| ·mRNA的反转录 | 第44-45页 |
| ·半定量RT-PCR | 第45页 |
| ·各种处理的表型观察 | 第45页 |
| ·离子的电渗漏检测 | 第45-46页 |
| 三、实验结果 | 第46-50页 |
| 1 AtCEO2生物信息学分析 | 第46页 |
| 2 T-DNA插入突变体的鉴定和纯合体的筛选 | 第46-47页 |
| 3 各种非生物胁迫对atceo2-1生长的影响 | 第47-50页 |
| ·atceo2-1突变体对重金属汞敏感 | 第47-49页 |
| ·atceo2-1对H_2O_2敏感 | 第49-50页 |
| ·重金属胁迫破坏了细胞膜结构的完整性 | 第50页 |
| 四、讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 AtCEO2表达、定位及对重金属反应的机制 | 第52-70页 |
| 一、前言 | 第52页 |
| 二、材料和方法 | 第52-62页 |
| 1 实验材料 | 第52-53页 |
| ·植物材料和菌株 | 第52页 |
| ·质粒载体 | 第52页 |
| ·实验试剂 | 第52-53页 |
| ·实验仪器 | 第53页 |
| ·培养基 | 第53页 |
| ·PCR引物 | 第53页 |
| 2 实验方法 | 第53-62页 |
| ·植物材料的种植 | 第53-54页 |
| ·丙二醛的测定 | 第54页 |
| ·叶片半薄切片的制作 | 第54-55页 |
| ·超薄切片制作 | 第55-56页 |
| ·DAB染色原位检测H_2O_2 | 第56页 |
| ·NBT染色原位检测超氧阴离子 | 第56页 |
| ·激光共聚焦显微检测技术测定H_2O_2的产生 | 第56-57页 |
| ·β-葡糖苷酸酶的组织化学鉴定 | 第57-58页 |
| ·AtCEO2 cDNA全长序列的扩增 | 第58页 |
| ·PCR产物的回收和纯化 | 第58页 |
| ·重组质粒构建 | 第58-59页 |
| ·重组质粒对E.coli的转化 | 第59-61页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第61-62页 |
| ·转基因植物的筛选 | 第62页 |
| ·AtCEO2亚细胞定位方法 | 第62页 |
| 三、实验结果 | 第62-68页 |
| 1 拟南芥AtCEO2 cDNA克隆与鉴定 | 第62-64页 |
| ·总RNA的质量鉴定 | 第62页 |
| ·拟南芥AtCEO2启动子克隆及pCMBIA1381-GUS融合表达载体的构建与鉴定 | 第62-63页 |
| ·AtCEO2组织表达分析 | 第63-64页 |
| 2 AtCEO2的亚细胞定位 | 第64-66页 |
| ·pEGAD-GFP-AtCEO2重组质粒构建与鉴定 | 第64-65页 |
| ·AtCEO2的GFP定位 | 第65-66页 |
| 3 HgCl_2胁迫条件下诱导atceo2-1突变体ROS产生 | 第66-67页 |
| 4 重金属胁迫对atceo2-1叶绿体结构的影响 | 第67-68页 |
| 四、讨论 | 第68-70页 |
| 1 AtCEO2基因可能参与了重金属汞诱导的氧化胁迫的应答 | 第68-69页 |
| 2 AtCEO2基因可能参与了HgCl_2诱导的氧化胁迫引起的细胞伤害 | 第69页 |
| 3 AtCEO2蛋白表达定位于细胞核 | 第69-70页 |
| 第六章 AtCEO2调控氧化信号转导及相关基因的表达 | 第70-84页 |
| 一、前言 | 第70-71页 |
| 二、材料和方法 | 第71-78页 |
| 1 实验材料 | 第71-74页 |
| ·植物材料 | 第71页 |
| ·试验仪器 | 第71页 |
| ·试剂和溶液 | 第71-74页 |
| ·Real-time PCR引物 | 第74页 |
| 2 实验方法 | 第74-78页 |
| ·Real-time PCR分析 | 第74-76页 |
| ·酵母双杂交操作方法 | 第76-78页 |
| 三 实验结果 | 第78-82页 |
| 1 AtCEO2和AtGPX3在酵母中的相互作用 | 第79-80页 |
| 2 AtCEO2对抗坏血酸过氧化物酶(APX1)表达的影响 | 第80-82页 |
| ·APX1 Real-time PCR引物的验证 | 第80页 |
| ·atceo2-1中APX1的表达情况 | 第80-81页 |
| ·atceo2-1中其他基因的表达情况 | 第81-82页 |
| 四 讨论 | 第82-84页 |
| 第七章 结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
