| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-14页 |
| 第一部分 引言 | 第14-39页 |
| 第一章 植物对非生物胁迫反应及信号转导 | 第14-35页 |
| 一、植物高温胁迫反应及其信号转导 | 第14-18页 |
| 1.热激蛋白 | 第15-16页 |
| 2.热激转录因子 | 第16-17页 |
| 3.热激反应信号转导 | 第17-18页 |
| 二、盐胁迫信号转导机制 | 第18-24页 |
| 1.植物细胞对离子的吸收和区域化 | 第19-21页 |
| 2.SOS信号转导途径 | 第21-24页 |
| 三、非生物胁迫感受和气孔运动的调节 | 第24-35页 |
| 1.不同环境刺激与气孔反应 | 第25-29页 |
| 2.保卫细胞膜上离子通道 | 第29-31页 |
| 3.非生物胁迫感受和气孔运动 | 第31-35页 |
| 第二章 立题依据和实验技术线路 | 第35-39页 |
| 一、立题依据 | 第35-38页 |
| 1.逆境胁迫与活性氧产生 | 第35页 |
| 2.活性氧与气孔运动 | 第35页 |
| 3.逆境胁迫、气孔运动和活性氧 | 第35-36页 |
| 4.远红外成像技术研究气孔运动 | 第36-38页 |
| 二、实验设计线路 | 第38-39页 |
| 第二部分 活性氧不敏感突变体的气孔调控反应 | 第39-84页 |
| 第三章 H_2O_2不敏感拟南芥突变体的筛选及突变体分析 | 第39-64页 |
| 一、引言 | 第39-40页 |
| 二、材料和方法 | 第40-53页 |
| 1.植物材料培养 | 第40-41页 |
| 2.H_2O_2和高温胁迫相关突变体的筛选及表型分析 | 第41-42页 |
| 3.突变体的遗传学分析和图位克隆 | 第42-44页 |
| 4.质粒载体的构建 | 第44-49页 |
| 5.农杆菌(GV3101)感受态细胞的制备及转化 | 第49-50页 |
| 6.转基因植株的筛选和鉴定 | 第50页 |
| 7.β-葡糖醛酸酶(GUS)的组织化学鉴定 | 第50-51页 |
| 8.GFP融合蛋白的细胞定位分析 | 第51页 |
| 9.定量PCR分析pCAMBIA1205-ROI1转基因植株的ROI1基因表达 | 第51-52页 |
| 10.ROI1基因T-DNA插入突变体的鉴定 | 第52-53页 |
| 三、实验结果 | 第53-61页 |
| 1.远红外成像技术筛选高温敏感拟南芥突变体roi30和roi45 | 第53-54页 |
| 2.roi1-1和roi1-2缺乏对高温胁迫的抗性 | 第54-55页 |
| 3.高温胁迫对roi1-1和roi1-2气孔开度和叶片失水率的影响 | 第55-56页 |
| 4.高温对roi1-1和roi1-2死亡率的影响 | 第56-57页 |
| 5.roi1-1利roi1-2突变体遗传学分析 | 第57页 |
| 6.图位克隆突变基因 | 第57-58页 |
| 7.ROI1组织表达分析 | 第58-59页 |
| 8.ROI1的细胞内定位分析 | 第59-60页 |
| 9.ROI1超表达植株(OE-ROI1)和T-DNA插入突变体的表型分析 | 第60-61页 |
| 四、讨论 | 第61-64页 |
| 第四章 ROI1和HSF3互作及在植物抗高温反应中的作用 | 第64-84页 |
| 一、引言 | 第64页 |
| 二、材料和方法 | 第64-73页 |
| 1.载体的构建 | 第64-65页 |
| 2.酵母双杂交 | 第65-68页 |
| 3.Pull-Down | 第68-69页 |
| 4.ROI1重组GST融合蛋白表达、提取和鉴定 | 第69-70页 |
| 5.YFP荧光的分析实验 | 第70-71页 |
| 6.蛋白磷酸化实验 | 第71页 |
| 7.RT-PCR和定量PCR实验 | 第71-72页 |
| 8.HSF3和Gols1的T-DNA插入突变体的鉴定 | 第72-73页 |
| 三、结果 | 第73-81页 |
| 1.ROI1相互作用蛋白的筛选和分析 | 第73-75页 |
| 2.YFP融合蛋白技术分析ROI1和HSF3在体内互作 | 第75-76页 |
| 3.ROI1蛋白的激酶活性分析 | 第76-77页 |
| 4.roil-1突变体内热激蛋白基因的表达分析 | 第77-78页 |
| 5.gols1、hsf3、roi1-1和roi1-1/hsf3双突变体的高温胁迫表型分析 | 第78-79页 |
| 6.ROI1和HSF3基因突变对拟南芥H_2O_2产生和气孔开度的影响 | 第79-81页 |
| 四、讨论 | 第81-84页 |
| 第三部分 H_2O_2作为根源信号介导气孔反应机制 | 第84-111页 |
| 第五章 H_2O_2介导NaCl胁迫诱导蚕豆气孔的关闭反应 | 第84-100页 |
| 一、引言 | 第84-85页 |
| 二、材料和方法 | 第85-88页 |
| 1.植物材料 | 第85页 |
| 2.土壤NaCl胁迫条件下,蚕豆叶片表面温度的测定 | 第85-86页 |
| 3.表皮条生物分析 | 第86页 |
| 4.Na~+、K~+含量的测定 | 第86页 |
| 5.标准曲线的制作 | 第86-87页 |
| 6.DAB染色测定H_2O_2含量 | 第87页 |
| 7.激光扫描共聚焦检测 | 第87-88页 |
| 三、实验结果 | 第88-97页 |
| 1.土壤NaCl胁迫引起蚕豆叶片温度升高 | 第88-90页 |
| 2.土壤NaCl胁迫诱导蚕豆叶片气孔关闭 | 第90-91页 |
| 3.土壤NaCl胁迫增加蚕豆叶片Na~+的含量 | 第91-92页 |
| 4.NaCl直接处理不能促进蚕豆叶片表皮条气孔关闭 | 第92-93页 |
| 5.土壤中的NaCl胁迫可促进蚕豆根部H_2O_2含量增加 | 第93页 |
| 6.土壤NaCl胁迫对蚕豆叶片保卫细胞H_2O_2含量的影响 | 第93-94页 |
| 7.NaCl直接处理对保卫细胞H_2O_2含量的影响 | 第94-95页 |
| 8.土壤NaCl胁迫促进蚕豆蒸腾流中H_2O_2浓度增加 | 第95-96页 |
| 9.蒸腾流和H_2O_2对蚕豆表皮条气孔开度的影响 | 第96-97页 |
| 四、讨论 | 第97-100页 |
| 第六章 H_2O_2对蚕豆保卫细胞质膜K~+通道和Na~+、K~+积累的影响 | 第100-111页 |
| 一、引言 | 第100-101页 |
| 二、材料和办法 | 第101-102页 |
| 1.植物材料 | 第101页 |
| 2.气孔开度的分析 | 第101页 |
| 3.等离子发射光普测定蚕豆叶片Na~+和K~+浓度 | 第101页 |
| 4.保卫细胞原生质体的分离 | 第101页 |
| 5.FDA分析原生质体活性 | 第101页 |
| 6.膜片钳技术记录全细胞通道电流 | 第101-102页 |
| 7.通道电流分析 | 第102页 |
| 三、实验结果 | 第102-108页 |
| 1.外源喷施H_2O_2蚕豆气孔开度影响 | 第102-103页 |
| 2.H_2O_2预处理对NaCl胁迫条件下蚕豆Na~+、K~+含量和K~+/Na~+比值的影响 | 第103-104页 |
| 3.蚕豆保卫细胞原生质体的分离及活性鉴定 | 第104-105页 |
| 4.膜片钳记录离子通道电流类型分析 | 第105-106页 |
| 5.外源NaCl对保卫细胞原生质体质膜K~+通道电流的影响 | 第106-107页 |
| 6.外源H_2O_2可以抑制Na~+诱导的保卫细胞质膜K~+通道电流 | 第107-108页 |
| 四、讨论 | 第108-111页 |
| 第四部分 结论 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-127页 |
| 致谢 | 第127页 |
