| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-25页 |
| ·泛素-蛋白酶体途径研究概况 | 第8-25页 |
| ·泛素 | 第8-9页 |
| ·参与泛素-蛋白酶体途径的酶类 | 第9-12页 |
| ·泛素活化酶E1 | 第9-10页 |
| ·泛素结合酶E2 | 第10页 |
| ·泛素连接酶E3 | 第10-11页 |
| ·E4 | 第11-12页 |
| ·泛素-蛋白酶体途径与疾病 | 第12-13页 |
| ·肿瘤 | 第12页 |
| ·神经系统疾病 | 第12-13页 |
| ·炎症 | 第13页 |
| ·Doa1(Ufd3)蛋白的研究概况 | 第13-15页 |
| ·N-末端残基控制的蛋白质降解途径 | 第13-14页 |
| ·Doa1(Ufd3)的研究概况 | 第14-15页 |
| ·结构生物学研究进展 | 第15-21页 |
| ·蛋白质结构研究的方法 | 第16-18页 |
| ·X-射线晶体学解析蛋白质结构的基本流程 | 第18页 |
| ·蛋白序列分析 | 第18-19页 |
| ·克隆和表达载体 | 第19页 |
| ·重组蛋白质的表达 | 第19页 |
| ·重组蛋白质的纯化 | 第19-20页 |
| ·免疫印迹检测 | 第20-21页 |
| ·本课题的研究目的及方法 | 第21-25页 |
| ·研究内容 | 第21页 |
| ·研究方法 | 第21页 |
| ·研究目的及意义 | 第21-25页 |
| 第二章 载体构建及融合蛋白的表达纯化 | 第25-44页 |
| ·材料和方法 | 第25-34页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·质粒、菌种 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·仪器 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-34页 |
| ·Doa1(325-440)Doa1(320-C)T载体和表达载体pGEX-6p-1 PET-28a重组质粒的构建 | 第25-30页 |
| ·重组Doa1(325-440)和Doa1(320-C)pGEX-6p-1融合蛋白的试表达 | 第30-31页 |
| ·重组Doa1(325-440)和Doa1(320-C)pGEX-6p-1融合蛋白的大量表达 | 第31页 |
| ·重组Doa1(325-440)和Doa1(320-C)pGEX-6p-1融合蛋白的纯化 | 第31-33页 |
| ·重组Doa1(320-C)-PET28a融合蛋白的试表达 | 第33页 |
| ·重组Doa1(320-C)-PET28a融合蛋白的大量表达 | 第33页 |
| ·重组Doa1(320-C)-PET28a融合蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| ·结果 | 第34-41页 |
| ·T载体和表达载体pGEX-6p-1 PET-28a的Doa1(325-440)Doa1(320-C)重组质粒的构建 | 第34-36页 |
| ·Doa1(325-440)和Doa1(320-C)PCR结果 | 第34页 |
| ·Doa1(325-440)Doa1(320-C)重组质粒双酶切鉴定结果 | 第34-36页 |
| ·融合蛋白的表达纯化 | 第36-41页 |
| ·融合蛋白Doa1(325-440)-6p-1试表达结果 | 第36页 |
| ·融合蛋白Doa1(325-440)-6p-1 Prescision Protease酶切及纯化结果 | 第36-38页 |
| ·融合蛋白Doa1(320-C)-6p-1试表达结果 | 第38页 |
| ·融合蛋白Doa1(320-C)-6p-1 Prescision Protease酶切结果 | 第38-39页 |
| ·融合蛋白Doa1(320-C)-PET28a试表达结果 | 第39页 |
| ·融合蛋白Doa1(320-C)-PET28a大量表达及纯化结果 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41-44页 |
| 第三章 Doa1蛋白晶体生长条件的筛选及优化 | 第44-53页 |
| ·材料和方法 | 第44-47页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·试剂 | 第44页 |
| ·仪器 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-47页 |
| ·Doa1(325-440)和Doa1(320-C)蛋白晶体生长条件初筛 | 第45页 |
| ·Doa1(320-C)蛋白晶体生长条件的优化 | 第45-46页 |
| ·母体蛋白晶体数据收集 | 第46页 |
| ·Doa1(320-C)蛋白晶体重原子浸泡 | 第46页 |
| ·Doa1(320-C)蛋白三维结构解析 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-50页 |
| ·Doa1(325-440)和Doa1(320-C)蛋白晶体条件初筛 | 第47页 |
| ·Doa1(320-C)蛋白晶体生长条件的优化 | 第47-48页 |
| ·Doa1(320-C)蛋白晶体重原子浸泡、结构解析 | 第48-50页 |
| ·讨论 | 第50-53页 |
| 第四章 Doa1(320-C)与Cdc48相互作用氨基酸结合位点的确定 | 第53-58页 |
| ·材料和方法 | 第53-56页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53页 |
| ·仪器 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-56页 |
| ·采用定点突变方法构建突变体 | 第53-56页 |
| ·Doa1(320-C)-6p-1突变体对Cdc48相互作用的影响验证 | 第56页 |
| ·结果 | 第56-57页 |
| ·Doa1(320-C)-pGEX-6p-1突变体的构建 | 第56页 |
| ·Doa1(320-C)-6p-1突变体对Cdc48相互作用的影响验证 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| 结论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 附录1 缩略词 | 第65-66页 |
| 附录2 SDS-PAGE电泳配方 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
