| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-23页 |
| 1 初情期启动内分泌调节机制的相关研究 | 第12-15页 |
| ·影响GnRH 神经元的神经内分泌因素 | 第12-14页 |
| ·神经递质 | 第12-13页 |
| ·生长因子 | 第13-14页 |
| ·激素代谢异常 | 第14页 |
| ·性腺对性激素敏感度异常 | 第14-15页 |
| 2 初情期启动下丘脑分子调控机制的最新研究进展 | 第15-19页 |
| ·KiSS-1 基因与初情期的关系研究 | 第15-16页 |
| ·KiSS-1 基因结构及其定位 | 第15页 |
| ·KiSS-1 基因与初情期启动 | 第15-16页 |
| ·Leptin 基因与初情期的关系研究 | 第16-19页 |
| ·Leptin 基因结构及其定位 | 第16页 |
| ·Leptin 基因的生理功能 | 第16-18页 |
| ·Leptin 基因与哺乳动物初情期的启动 | 第18-19页 |
| 3 mRNA 差异显示技术（DDRT-PCR）简介 | 第19-21页 |
| ·DDRT-PCR 的原理 | 第19-20页 |
| ·DDRT-PCR 的发展 | 第20-21页 |
| ·DDRT-PCR 的优点与局限性 | 第21页 |
| 4 DDRT-PCR 技术在猪繁育方面的应用 | 第21-22页 |
| ·在猪初情期启动方面的应用 | 第21页 |
| ·在猪胚胎、个体发育研究中的应用 | 第21-22页 |
| ·在猪繁殖方面的应用 | 第22页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| 第二部分 | 第23-47页 |
| 引言 | 第23页 |
| 1 实验材料 | 第23-26页 |
| ·试验动物 | 第23页 |
| ·网络资源及软件 | 第23页 |
| ·试剂及引物 | 第23-25页 |
| ·RNA 提取试剂 | 第23页 |
| ·差异显示PCR、Real-Time PCR 及电泳试剂 | 第23-24页 |
| ·电泳所需溶液配方 | 第24页 |
| ·染色溶液的配制 | 第24页 |
| ·差异显示PCR 引物 | 第24-25页 |
| ·仪器设备 | 第25-26页 |
| 2 实验方法 | 第26-34页 |
| ·猪下丘脑组织的获取 | 第26页 |
| ·猪下丘脑组织总RNA 的提取 | 第26页 |
| ·甲醛变性琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA 质量 | 第26-27页 |
| ·RNA 池的制备 | 第27页 |
| ·DNase I 处理 | 第27页 |
| ·cDNA 的合成 | 第27页 |
| ·DDRT-PCR 反应 | 第27-28页 |
| ·12%聚丙烯酰胺凝胶制作及电泳 | 第28-29页 |
| ·银染法显色 | 第29页 |
| ·差异片段的切取 | 第29-30页 |
| ·差异片段的二次扩增 | 第30页 |
| ·PCR 产物克隆 | 第30-32页 |
| ·Reverse Northern 杂交法鉴定差异表达ESTs 假阳性 | 第32页 |
| ·real-time PCR 定量分析 | 第32-34页 |
| 3. 结果 | 第34-40页 |
| ·RNA 纯度与浓度 | 第34页 |
| ·cDNA 鉴定结果 | 第34-35页 |
| ·mRNA 差异显示结果 | 第35-36页 |
| ·差异片段的回收与再次扩增 | 第36-37页 |
| ·差异片段的克隆及 PCR 鉴定 | 第37页 |
| ·Reverse Northern 杂交结果及序列信息 | 第37页 |
| ·差异片段的序列分析 | 第37-39页 |
| ·real-time PCR 定量分析结果 | 第39-40页 |
| 4. 讨论 | 第40-47页 |
| ·DDRT-PCR 参数的优化 | 第40-41页 |
| ·保证起始(模板)总 RNA 的质量与浓度 | 第40页 |
| ·降低dNTP 浓度 | 第40页 |
| ·选择最适的反转录和 PCR 退火温度以及选用最佳引物组合 | 第40-41页 |
| ·DDRT-PCR 假阳性的鉴定过程 | 第41-42页 |
| ·差异序列的生物信息学分析 | 第42-47页 |
| ·MSO1功能预测 | 第42-44页 |
| ·MSO2 功能预测 | 第44-45页 |
| ·MSO3 、MSO4 功能预测 | 第45-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第57页 |
