| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-23页 |
| ·甜瓜坏死斑点病毒的研究现状 | 第10-12页 |
| ·甜瓜坏死斑点病毒的生物学特性 | 第12-14页 |
| ·甜瓜坏死斑点病毒的分子生物学特性 | 第12-13页 |
| ·甜瓜坏死斑点病毒的传播方式和寄主范围 | 第13-14页 |
| ·基因克隆技术的研究现状 | 第14-22页 |
| ·RACE的原理 | 第15-21页 |
| ·热不对称交错PCR(Thermal Asymmet ric Interlaced PCR) | 第21-22页 |
| ·TAIL-PCR技术的原理 | 第21页 |
| ·TAIL-PCR的优点以及技术难点 | 第21-22页 |
| ·研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 2 材料 | 第23-25页 |
| ·毒源及菌株 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·常用培养基和溶液的配置 | 第23页 |
| ·引物 | 第23-25页 |
| 3 实验方法 | 第25-32页 |
| ·病毒的繁殖 | 第25页 |
| ·病毒的粗提(Saito&Kishi,1967) | 第25页 |
| ·RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·器皿及仪器的处理 | 第25页 |
| ·试剂的处理 | 第25页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第26页 |
| ·RT-PCR(反转录PCR) | 第26-29页 |
| ·MNSV各个中间片段的获得 | 第27页 |
| ·5'UTR的获得 | 第27-29页 |
| ·3'UTR的获得 | 第29页 |
| ·DNA片段的回收和纯化 | 第29页 |
| ·CaCl_2法制备感受态细胞 | 第29-30页 |
| ·LB培养基的配制 | 第30页 |
| ·连接(10μl) | 第30页 |
| ·转化 | 第30页 |
| ·质粒的提取 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第31页 |
| ·全长的拼接及序列分析 | 第31-32页 |
| 4 结果与分析 | 第32-42页 |
| ·RNA的提取结果 | 第32页 |
| ·MNSV基因组各个片段的获得 | 第32-36页 |
| ·P3-P4的扩增结果 | 第32-33页 |
| ·P7-P8的扩增结果 | 第33页 |
| ·P5-P6的扩增结果 | 第33-34页 |
| ·3'末端序列的获得 | 第34-35页 |
| ·5'端末端序列的获得 | 第35-36页 |
| ·甜瓜坏死斑点病毒中国分离物全基因组序列分析 | 第36-38页 |
| ·MNSV中国分离物各个基因及其编码的五个蛋白的序列分析 | 第38-42页 |
| ·MNSV编码p29蛋白的基因的核苷酸及其氨基酸序列分析 | 第38页 |
| ·MNSV编码p89蛋白的基因的核苷酸及其氨基酸序列分析 | 第38-39页 |
| ·MNSV编码p7A蛋白的基因的核苷酸及其氨基酸序列分析 | 第39页 |
| ·MNSV编码p7B蛋白的基因的核苷酸及其氨基酸序列分析 | 第39-40页 |
| ·MNSV编码p42蛋白的基因的核苷酸及其氨基酸序列分析 | 第40-42页 |
| 5 讨论 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| 附录 | 第48-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
