| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-26页 |
| ·苹果茎痘病毒研究进展 | 第13-17页 |
| ·ASPV的生物学特性 | 第13-15页 |
| ·ASPV的寄主及分布 | 第13-14页 |
| ·ASPV的株系特征 | 第14页 |
| ·ASPV的传播途径 | 第14-15页 |
| ·ASPV的基因组结构 | 第15页 |
| ·ASPV的病毒粒子特性 | 第15页 |
| ·ASPV的检测 | 第15-17页 |
| ·生物学鉴定 | 第15-16页 |
| ·血清学法 | 第16页 |
| ·分子生物学检测 | 第16-17页 |
| ·植物病毒病防治策略 | 第17-21页 |
| ·无病毒苗木的培育 | 第17-18页 |
| ·交叉保护 | 第18-19页 |
| ·抗病毒转基因工程 | 第19-21页 |
| ·CP介导的抗病研究 | 第19-20页 |
| ·反义RNA技术 | 第20-21页 |
| ·RNAi的研究进展 | 第21-22页 |
| ·转基因植物的检测 | 第22页 |
| ·GFP的研究进展 | 第22-25页 |
| ·GFP的发现 | 第22-23页 |
| ·GFP的发光机制 | 第23页 |
| ·GFP的改良 | 第23-24页 |
| ·GFP在植物生物技术研究中的应用 | 第24-25页 |
| ·研究目的和意义 | 第25-26页 |
| 第二章 苹果茎痘病毒CP基因介导的抗病毒研究 | 第26-37页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·转基因植物 | 第26页 |
| ·供试毒源 | 第26页 |
| ·ASPV抗体 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-30页 |
| ·抗性植株的生根 | 第26-27页 |
| ·转基因植株的分子生物学鉴定 | 第27-30页 |
| ·PCR检测 | 第27-28页 |
| ·Western blot分析 | 第28-30页 |
| ·转基因植株的抗病性分析 | 第30页 |
| ·结果与分析 | 第30-36页 |
| ·转ASPV cp基因正义链和反义链烟草植株的分子生物学检测 | 第30-34页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第30-33页 |
| ·Western blot分析 | 第33-34页 |
| ·转基因植株的抗病性分析 | 第34-36页 |
| ·小结与讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 苹果茎痘病毒cp与gfp基因融合的植物表达载体的构建 | 第37-54页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·供试材料 | 第37页 |
| ·叶盘法转化所用西方烟叶片 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-47页 |
| ·GFP基因的克隆和测序 | 第38-41页 |
| ·引物的设计 | 第38页 |
| ·gfp基因的PCR扩增与检测 | 第38-39页 |
| ·gfp基因的回收与纯化 | 第39页 |
| ·目标片段与载体的连接 | 第39页 |
| ·连接产物转化宿主菌 | 第39-40页 |
| ·菌液的保存及质粒DNA的制备 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第41页 |
| ·序列测定和分析 | 第41页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1301S-cp(+)-gfp的构建 | 第41-43页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1301S-cp(+)-gfp的构建策略 | 第41-42页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1301S-cp(+)-gfp的构建方法 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第43页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1301S-cp(-)-gfp的构建 | 第43-44页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1301S-cp(-)-gfp的构建策略 | 第43页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1301S-cp(-)-gfp的构建方法 | 第43-44页 |
| ·植物表达载体转化农杆菌 | 第44-45页 |
| ·叶盘法转化西方烟 | 第45-47页 |
| ·根癌农杆菌EHA105感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·重组植物表达载体电击转化根癌农杆菌感受态细胞 | 第45-46页 |
| ·烟草的转化和筛选 | 第46-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-52页 |
| ·gfp基因的克隆和测序 | 第47-48页 |
| ·gfp基因的PCR扩增 | 第47页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第47页 |
| ·gfb基因的序列分析 | 第47-48页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1301S-cp(+)-gfp的构建 | 第48-49页 |
| ·载体pCAMBIA1301S-cp(+)的验证 | 第48页 |
| ·重组植物表达载体pCAMBIA1301S-cp(+)-gfp的PCR鉴定 | 第48-49页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1301S-cp(-)-gfp的构建 | 第49-50页 |
| ·载体pCAMBIA1301S-cp(-)的验证 | 第49-50页 |
| ·重组植物表达载体pCAMBIA1301S-cp(-)-gfp的PCR鉴定 | 第50页 |
| ·植物表达载体转化农杆菌EHA105 | 第50-51页 |
| ·叶盘法转化西方烟 | 第51-52页 |
| ·叶盘的选择培养 | 第51页 |
| ·叶盘的分化 | 第51-52页 |
| ·小结与讨论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 附录:主要试剂及溶液的配制 | 第61-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
