| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-36页 |
| 前言 | 第12页 |
| 1 海胆概述及研究背景 | 第12-16页 |
| ·海胆的生物学地位及研究意义 | 第12-14页 |
| ·光棘球海胆的研究进展 | 第14页 |
| ·海胆基因组计划 | 第14-16页 |
| 2 海胆MYP的研究进展 | 第16-20页 |
| ·海胆MYP的概念及分类 | 第16-17页 |
| ·海胆MYP与其他物种卵黄蛋白(原)比较 | 第17-19页 |
| ·发生比较 | 第17页 |
| ·结构及分子量比较 | 第17-18页 |
| ·功能比较 | 第18-19页 |
| ·海胆MYP研究进展及前景 | 第19-20页 |
| 3 基因侧翼序列的获得 | 第20-24页 |
| ·质粒拯救(plasmid rescue)法 | 第21页 |
| ·反向PCR(inverse or inverted PCR,IPCR)法 | 第21-22页 |
| ·PCR-walking | 第22页 |
| ·连接介导PCR(Ligation-mediated PCR,LMPCR) | 第22-23页 |
| ·热不对称交错PCR(TAIL-PCR) | 第23-24页 |
| 4 SNP标记的兴起和应用 | 第24-31页 |
| ·分子标记 | 第24-25页 |
| ·分子标记的种类及应用 | 第25-27页 |
| ·单核苷酸多态性(SNPs) | 第27-31页 |
| ·SNPs的优势和特点 | 第27-28页 |
| ·SNPs的分析方法 | 第28页 |
| ·SNPs的检测方法 | 第28-31页 |
| 参考文献 | 第31-36页 |
| 第二章 海胆MYP基因侧翼序列的获得及分析 | 第36-56页 |
| 1 材料 | 第36页 |
| ·实验材料 | 第36页 |
| ·仪器设备 | 第36页 |
| ·实验试剂及配制 | 第36页 |
| 2 方法 | 第36-44页 |
| ·海胆总DNA的纯化提取 | 第36-37页 |
| ·实验之前的准备 | 第37页 |
| ·实验操作步骤 | 第37页 |
| ·MYP基因上游区域引物设计 | 第37-38页 |
| ·MYP基因下游区域引物设计 | 第38-39页 |
| ·Genome Walking | 第39-42页 |
| ·实验原理 | 第39-40页 |
| ·特异性引物设计原则 | 第40页 |
| ·实验步骤 | 第40-42页 |
| ·实验流程简图 | 第42页 |
| ·PCR产物的克隆测序 | 第42-44页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第42-43页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第43-44页 |
| ·纯化产物与质粒载体的连接反应 | 第44页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第44页 |
| ·转化子的筛选与鉴定 | 第44页 |
| ·阳性克隆测序及分析 | 第44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-51页 |
| ·MYP基因上游启动子区域序列 | 第44-48页 |
| ·测序结果 | 第44-46页 |
| ·结果分析 | 第46-48页 |
| ·同源性比对 | 第46页 |
| ·网络分析工具 | 第46页 |
| ·MYP基因启动子结构分析 | 第46页 |
| ·MYP转录调控区中转录因子结合序列 | 第46-48页 |
| ·MYP基因下游分析 | 第48-51页 |
| ·测序结果 | 第48-49页 |
| ·SNPs检测 | 第49页 |
| ·结果分析 | 第49-51页 |
| ·序列处理 | 第49页 |
| ·同源性比对 | 第49-50页 |
| ·SNP分析 | 第50-51页 |
| ·多聚腺苷作用信号分析 | 第51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| ·MYP基因上游 | 第51-52页 |
| ·MYP基因下游 | 第52-53页 |
| 5 小结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-56页 |
| 第三章 海胆MYP基因内含子系列的获得及分析 | 第56-71页 |
| 1 材料 | 第56-57页 |
| ·实验材料 | 第56页 |
| ·实验试剂及配制 | 第56-57页 |
| 2 方法 | 第57-59页 |
| ·海胆总DNA的提取 | 第57页 |
| ·DNA样品的检测 | 第57-58页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第57页 |
| ·分光光度法检测 | 第57-58页 |
| ·引物设计 | 第58-59页 |
| ·PCR扩增条件 | 第59页 |
| ·测序及序列分析 | 第59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-67页 |
| ·测序及序列分析 | 第59-66页 |
| ·内含子5、6,外显子6 | 第59-61页 |
| ·测序结果 | 第59-60页 |
| ·序列分析 | 第60-61页 |
| ·内含子11 | 第61-62页 |
| ·测序结果 | 第61页 |
| ·序列分析 | 第61-62页 |
| ·内含子14、15,外显子15 | 第62-63页 |
| ·测序结果 | 第62-63页 |
| ·序列分析 | 第63页 |
| ·内含子16 | 第63页 |
| ·测序结果 | 第63页 |
| ·序列分析 | 第63页 |
| ·内含子17 | 第63-65页 |
| ·测序结果 | 第63-64页 |
| ·序列分析 | 第64-65页 |
| ·内含子18 | 第65-66页 |
| ·测序结果 | 第65页 |
| ·序列分析 | 第65-66页 |
| ·内含子20 | 第66页 |
| ·测序结果 | 第66页 |
| ·序列分析 | 第66页 |
| ·内含子20的SNPs分析 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-68页 |
| 5 小结 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-71页 |
| 附录 | 第71-78页 |
| 附录A 常用缩写词及英汉对照 | 第71-72页 |
| 附录B MYP基因mRNA及上下游、部分内含子序列 | 第72-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 作者简介 | 第79-80页 |
