| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-32页 |
| ·PRRSV 的分子生物学 | 第18-24页 |
| ·PRRSV 的病毒粒子分类地位及其形态结构 | 第18-19页 |
| ·PRRSV 的基因组结构 | 第19-21页 |
| ·PRRSV 的非结构蛋白 | 第21页 |
| ·PRRSV 的次要结构蛋白 | 第21-22页 |
| ·PRRSV 的主要结构蛋白 | 第22-24页 |
| ·PRRSV 的遗传变异 | 第24页 |
| ·PRRSV 的致病机理 | 第24-26页 |
| ·PRRSV 感染引起的体液免疫 | 第24-25页 |
| ·PRRSV 感染引起机体的细胞免疫 | 第25-26页 |
| ·PRRSV 的抗体依赖性增强作用 | 第26页 |
| ·反向遗传学技术在 PRRSV 研究中的应用 | 第26-31页 |
| ·PRRSV 的反向遗传学基本策略 | 第27-28页 |
| ·PRRSV 反向遗传学在基因功能研究上的应用 | 第28-29页 |
| ·PRRSV 反向遗传学在致病机理上的应用 | 第29-30页 |
| ·PRRSV 反向遗传学在新型疫苗研制中的应用 | 第30-31页 |
| ·研究的目的和意义 | 第31-32页 |
| 第二章 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HUN4 株感染性克隆的构建及鉴定 | 第32-49页 |
| ·材料与方法 | 第33-42页 |
| ·病毒和细胞 | 第33页 |
| ·试验试剂和主要仪器设备 | 第33-34页 |
| ·PRRSV HUN4 全长CDNA 克隆的构建 | 第34-39页 |
| ·病毒的拯救 | 第39-41页 |
| ·包含全长CDNA 质粒的线性化 | 第39页 |
| ·体外转录 | 第39-40页 |
| ·体外转录后RNA 的纯化 | 第40页 |
| ·转染 | 第40-41页 |
| ·PRRSV HUN4 株感染性克隆的鉴定 | 第41页 |
| ·检测 GENOMIC MARKER | 第41页 |
| ·间接免疫荧光试验 | 第41页 |
| ·拯救病毒生物学分析 | 第41-42页 |
| ·病毒细胞TCID50 测定 | 第41页 |
| ·病毒生长曲线绘制 | 第41-42页 |
| ·结果 | 第42-47页 |
| ·PRRSV HUN4 株各片段RT-PCR 扩增结果 | 第42页 |
| ·PRRSV HUN4 株全长CDNA 的构建 | 第42-44页 |
| ·PBLUESCRIPT II SK(+)载体改造 | 第42-43页 |
| ·含 PRRSV HUN4 株全长 CDNA 质粒的鉴定 | 第43-44页 |
| ·PRRSV HUN4 株感染性克隆的鉴定 | 第44-46页 |
| ·GENOMIC MARKER 的鉴定 | 第44-46页 |
| ·间接免疫荧光试验 | 第46页 |
| ·PRRSV HUN4 株拯救病毒的生物学特征 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗株HUN4-F112 反向遗传操作平台的建立 | 第49-64页 |
| ·材料与方法 | 第50-56页 |
| ·细胞和毒株 | 第50-51页 |
| ·主要试剂和仪器设备 | 第51页 |
| ·引物的设计与合成 | 第51-52页 |
| ·HUN4-F112 株全长基因组各片段的扩增 | 第52页 |
| ·HUN4-F112 株全长基因组CDNA 克隆的构建 | 第52-54页 |
| ·RNA 的体外合成与转染 | 第54-55页 |
| ·拯救病毒的鉴定 | 第55页 |
| ·RT-PCR 检测GENOMIC MARKER | 第55页 |
| ·间接免疫荧光 | 第55页 |
| ·拯救病毒的生物学特性分析 | 第55-56页 |
| ·TCID50 的测定 | 第55页 |
| ·病毒生长曲线的绘制 | 第55-56页 |
| ·结果 | 第56-61页 |
| ·HUN4-F112 全长基因组各片段 RT-PCR 的扩增 | 第56页 |
| ·HUN4-F112 全长基因组 CDNA 克隆的构建 | 第56-58页 |
| ·PG25K 载体的测序鉴定 | 第56-57页 |
| ·含 HUN4-F112 全长基因组CDNA 质粒的鉴定 | 第57-58页 |
| ·病毒的拯救及鉴定 | 第58-61页 |
| ·讨论 | 第61-64页 |
| 第四章 含遗传标记的猪繁殖与呼吸综合征病毒突变株的拯救 | 第64-74页 |
| ·材料与方法 | 第65-68页 |
| ·细胞和毒株 | 第65页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第65页 |
| ·表位的替换 | 第65-67页 |
| ·引物的设计 | 第65-67页 |
| ·全长连接 | 第67页 |
| ·病毒的拯救 | 第67页 |
| ·拯救病毒的鉴定 | 第67-68页 |
| ·RT-PCR 检测GENOMIC MARKER | 第67页 |
| ·间接免疫荧光 | 第67-68页 |
| ·结果 | 第68-71页 |
| ·表位的缺失替换 | 第68-69页 |
| ·全长连接 | 第69页 |
| ·病毒的拯救 | 第69-70页 |
| ·拯救病毒的鉴定 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-74页 |
| 第五章 全文结论 | 第74-75页 |
| 附录 | 第75-80页 |
| 参考文献 | 第80-95页 |
| 致谢 | 第95-97页 |
| 作者简历 | 第97页 |
