| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 英文缩写词 | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-18页 |
| ·HIV 概况 | 第10-11页 |
| ·HIV 病毒 | 第10-11页 |
| ·抗HIV 治疗 | 第11页 |
| ·HIV-1 VPR | 第11-13页 |
| ·Vpr 结构 | 第11-12页 |
| ·Vpr 功能 | 第12-13页 |
| ·RNA 干扰 | 第13-16页 |
| ·siRNA | 第14页 |
| ·microRNA | 第14-15页 |
| ·RNAi 治疗AIDS 的研究现状 | 第15-16页 |
| ·RNAi 治疗中存在的问题 | 第16页 |
| ·研究目的及内容 | 第16-17页 |
| ·研究技术路线 | 第17-18页 |
| 第2章 HIV-1 VPR 表达质粒及以VPR 基因为靶点的小干扰RNA 表达质粒的构建 | 第18-32页 |
| ·实验材料 | 第18-20页 |
| ·菌株与质粒 | 第18页 |
| ·工具酶与试剂 | 第18页 |
| ·序列合成与测序 | 第18页 |
| ·主要仪器 | 第18-19页 |
| ·其它需配制的溶液 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-25页 |
| ·HIV-1 vpr 基因真核表达质粒pEGFP-Vpr 和pVpr-DsRed 的构建 | 第20-24页 |
| ·以vpr 基因为靶点的小干扰RNA 表达质粒pSUPER.basic-shRNA 和pSUPER.retro-shRNA 的构建 | 第24-25页 |
| ·实验结果 | 第25-29页 |
| ·HIV-1 vpr 基因真核表达质粒pEGFP-Vpr 和pVpr-DsRed 的构建 | 第25-27页 |
| ·以vpr 基因为靶点的小干扰RNA 表达质粒pSUPER.basic-shRNA 和pSUPER.retro-shRNA 的构建 | 第27-29页 |
| ·讨论 | 第29-30页 |
| ·本章小结 | 第30-32页 |
| 第3章 靶点特异性的SIRNA 对HIV-1 VPR 基因表达的抑制作用 | 第32-54页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·细胞株 | 第32页 |
| ·细胞培养的相关材料 | 第32页 |
| ·质粒、工具酶与试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32-33页 |
| ·其它配制溶液 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-39页 |
| ·细胞培养 | 第33-34页 |
| ·转染与共转染 | 第34页 |
| ·流式细胞仪检测GFP 表达情况 | 第34页 |
| ·Real-time PCR | 第34-37页 |
| ·假病毒包装能力和感染力测定 | 第37-39页 |
| ·实验结果 | 第39-49页 |
| ·荧光显微镜检测GFP-Vpr 或Vpr-DsRed 融合蛋白的表达 | 第39-41页 |
| ·流式细胞仪检测表达GFP-Vpr 融合蛋白的阳性细胞 | 第41-42页 |
| ·Real-time PCR 技术对vpr mRNA 拷贝数进行相对定量 | 第42-44页 |
| ·shRNA 对HIV-1 假病毒包装能力及复制能力的影响 | 第44-47页 |
| ·shRNA4 对靶基因vpr 抑制作用的量效关系研究 | 第47-49页 |
| ·讨论 | 第49-52页 |
| ·荧光显微技术和流式细胞术快速筛选有效的shRNA | 第49-50页 |
| ·有效的shRNA 可以降低靶基因mRNA 的拷贝数 | 第50-52页 |
| ·本章小结 | 第52-54页 |
| 第4章 靶点特异性的MICRORNA 对HIV-1 VPR 基因表达的抑制作用 | 第54-66页 |
| ·实验材料 | 第54页 |
| ·细胞株（略，同3.1.1） | 第54页 |
| ·细胞培养的相关材料（略，同3.1.2） | 第54页 |
| ·质粒、工具酶与试剂 | 第54页 |
| ·主要仪器（略，同3.1.4） | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-55页 |
| ·microRNA 表达质粒pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR 的改造 | 第54-55页 |
| ·筛选可以有效抑制靶基因vpr 表达的microRNA | 第55页 |
| ·构建基于miRNA 序列的pSUPER.basic-shRNA-m2 表达载体 | 第55页 |
| ·实验结果 | 第55-62页 |
| ·microRNA 表达质粒pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR 的改造 | 第55-56页 |
| ·构建基于miRNA 序列的pSUPER.basic-shRNA-m2 表达载体 | 第56-57页 |
| ·筛选可以有效抑制靶基因vpr 表达的microRNA | 第57-59页 |
| ·microRNA 对HIV-1 假病毒包装能力及复制能力的影响 | 第59-60页 |
| ·针对vpr 基因相同靶位点的两种表达载体的干扰作用比较 | 第60-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| ·本章小结 | 第64-66页 |
| 结论 | 第66-68页 |
| 展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 附录 | 第74-76页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
