| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| 1 多杀菌素及其产生菌的研究进展 | 第11-17页 |
| ·结构特点和理化性质 | 第11-12页 |
| ·杀虫活性与作用机制 | 第12-13页 |
| ·多杀菌素的生物合成 | 第13-16页 |
| ·聚酮链的生物合成与修饰 | 第14-15页 |
| ·鼠李糖与福乐糖胺的生物合成与连接 | 第15页 |
| ·多杀菌素生物合成基因簇侧翼基因 | 第15-16页 |
| ·提高多杀菌素产量 | 第16-17页 |
| ·常规理化诱变育种筛选高产菌 | 第16页 |
| ·通过基因改造提高多杀菌素产量 | 第16-17页 |
| 2 S-腺苷甲硫氨酸合成酶研究进展 | 第17-19页 |
| ·腺苷甲硫氨酸合成酶简介 | 第17-18页 |
| ·链霉菌属腺苷甲硫氨酸合成酶研究进展 | 第18-19页 |
| 3 细胞分裂激活因子SsgA的研究进展 | 第19-22页 |
| ·SsgA类蛋白只存在于形态复杂的放线菌中 | 第19-20页 |
| ·SALPs的功能 | 第20-21页 |
| ·ssgA基因的转录和翻译调控 | 第21-22页 |
| ·SsgA在工业发酵中的应用 | 第22页 |
| 4 立题依据和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-40页 |
| 1.材料 | 第24-29页 |
| ·供试菌株 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·抗生素及其使用浓度 | 第25-26页 |
| ·工具酶及抗体 | 第26页 |
| ·试剂盒 | 第26页 |
| ·PCR引物及产物测序 | 第26页 |
| ·常用溶液和缓冲液 | 第26-29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳试剂 | 第26-27页 |
| ·蛋白质电泳试剂 | 第27页 |
| ·Bradford法蛋白含量测定试剂 | 第27页 |
| ·大肠杆菌热转感受态制备溶液 | 第27页 |
| ·大肠杆菌电转感受态制备溶液 | 第27页 |
| ·快速检测裂解液 | 第27-28页 |
| ·刺糖多孢菌基因组DNA提取所需溶液 | 第28页 |
| ·链霉菌菌体蛋白提取液(Standard Buffer) | 第28页 |
| ·Western Blotting所需溶液 | 第28页 |
| ·Southern杂交所需试剂 | 第28-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| 2 研究方法 | 第29-40页 |
| ·菌种培养及保藏 | 第29-30页 |
| ·刺糖多孢菌基因组DNA的提取 | 第30页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的小量提取 | 第30-31页 |
| ·PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增ΦC31 int,attP位点 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增SAM-s和ssgA基因 | 第32页 |
| ·DNA的连接 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第33页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第33页 |
| ·转化子的快速筛选 | 第33-34页 |
| ·重组子的酶切鉴定 | 第34页 |
| ·SAM-s和ssgA基因的生物信息学分析 | 第34页 |
| ·基本参数的比较 | 第34页 |
| ·二级结构的预测比较 | 第34页 |
| ·SAM-s基因大肠杆菌表达载体的构建 | 第34-35页 |
| ·IPTG诱导大肠杆菌中重组基因的表达 | 第35页 |
| ·大肠杆菌-链霉菌穿梭表达载体pMF的构建 | 第35页 |
| ·SAM-s和ssgA基因链霉菌表达载体的构建 | 第35-37页 |
| ·大肠杆菌与链霉菌之间的属间接合转移 | 第37页 |
| ·Southern blotting | 第37-39页 |
| ·链霉菌细胞蛋白抽提物的制备 | 第39页 |
| ·发酵培养 | 第39页 |
| ·菌丝生长和抗生素形成情况的测定 | 第39页 |
| ·链霉菌的形态观察 | 第39-40页 |
| 第三章 结果与分析 | 第40-54页 |
| 1 刺糖多孢菌SAM-s和ssgA基因的克隆 | 第40-41页 |
| 2 SAM-s和SsgA蛋白的生物信息学分析 | 第41-42页 |
| ·基本参数 | 第41-42页 |
| ·二级结构的预测 | 第42页 |
| 3 大肠杆菌-链霉菌穿梭整合型载体pMF的构建 | 第42-44页 |
| 4 pMF在大肠杆菌与链霉菌属间接合转移及在染色体上的整合 | 第44-45页 |
| 5 SAM-s基因的功能研究 | 第45-50页 |
| ·SAM-s基因在大肠杆菌中的表达 | 第45-46页 |
| ·SAM-s基因在链霉菌中的表达 | 第46-50页 |
| ·利用pMF载体表达SAM-s基因 | 第46-48页 |
| ·SAM-s蛋白表达对天蓝色链霉菌生长和抗生素合成的影响 | 第48-50页 |
| 6 ssgA基因的功能研究 | 第50-54页 |
| ·ssgA-sp基因在天蓝色链霉菌ssgA阻断菌株GSA3中的表达 | 第50-51页 |
| ·ssgA-sp基因在变铅青链霉菌中的表达 | 第51-54页 |
| 讨论 | 第54-57页 |
| 主要结论和今后的研究设想 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读硕士学位期间撰写和发表的论文 | 第67-68页 |
