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水稻T-DNA插入突变体库侧翼序列的分离和OsBC1L家族基因的功能研究

目录第1-8页
中文摘要第8-10页
Abstract第10-12页
缩略名词表第12-13页
1 前言第13-35页
   ·水稻功能基因组研究第13-19页
     ·水稻全基因组测序工程第13-14页
     ·水稻全基因组的表达分析第14-16页
     ·基于突变体的水稻功能基因组研究第16-19页
       ·物理或者化学诱变第16页
       ·农杆菌介导的T-DNA插入第16-18页
       ·转座子插入第18-19页
       ·反转录转座子第19页
   ·几种T-DNA插入侧翼序列的分离方法第19-27页
     ·热不对称交错PCR(TAIL-PCR)第20-22页
     ·反向PCR第22-23页
     ·质粒拯救第23页
     ·接头PCR第23页
     ·主要的水稻突变体研究单位及侧翼序列数据库第23-27页
   ·纤维素合成机理的研究进展第27-35页
     ·植物细胞壁第27-28页
     ·纤维素第28-29页
     ·纤维素合成酶复合物第29-30页
     ·影响纤维素合成的突变体第30-35页
       ·CESA基因第31-33页
       ·KORRIGAN基因第33页
       ·KOBITO基因第33-34页
       ·COBRA基因第34-35页
2 本研究的目的和意义第35-36页
3 材料与方法第36-48页
   ·实验材料第36-37页
     ·植物材料第36页
     ·菌株和质粒第36-37页
   ·实验方法第37-48页
     ·T-DNA插入突变体库植株的阳性检测第37页
     ·T-DNA插入阳性植株侧翼序列的分离第37-39页
     ·OsBC1L家族成员的序列和系谱分析第39页
     ·基因芯片、RT-PCR和Real-time PCR表达分析第39-41页
     ·突变家系的基因型检测第41-42页
     ·遗传转化载体的构建第42-43页
     ·Southern杂交第43-44页
     ·组织化学染色与光学显微镜第44页
     ·扫描电镜第44-45页
     ·纤维素和木质素含量的测定第45页
     ·原位杂交第45-46页
     ·OsBC1L4蛋白的亚细胞定位第46页
     ·OsBC1L4蛋白的酵母双杂交实验第46-47页
     ·花粉萌发实验第47-48页
4 结果与分析第48-79页
   ·水稻T-DNA插入突变体库植株的阳性检测第48页
   ·水稻T-DNA插入阳性植株侧翼序列的分离第48-49页
   ·田间筛选具有分蘖突变表型的T-DNA插入家系第49页
   ·水稻OsBC1L家族成员的分子特征、表达模式和功能分析第49-58页
     ·水稻OsBC1L家族成员的发掘和序列分析第49-52页
     ·OsBC1L基因在水稻染色体中的复制第52页
     ·水稻OsBC1L家族的系谱分析第52-54页
     ·水稻OsBC1L家族基因的表达谱第54-56页
     ·水稻OsBC1L基因插入突变体的获得和表型鉴定第56-58页
   ·OsBC1L4基因的突变表型和功能分析第58-71页
     ·一个分蘖少、矮化突变体的表型分析第58页
     ·OsBC1L4基因的遗传分析和克隆第58-62页
     ·OsBC1L4编码一个GPI锚定的COBRA-like蛋白第62-63页
     ·osbc1l4突变体的细胞学缺陷第63-65页
     ·osbc1l4突变体纤维素含量降低第65-66页
     ·OsBC1L4基因的表达模式第66-67页
     ·OsBC1L4蛋白的亚细胞定位第67-68页
     ·OsBC1L4基因与其他纤维素合成相关基因的关系第68-69页
     ·几个纤维素合成基因和OsBC1L基因在osbc1l4突变体中的表达第69-71页
   ·OsBC1L5基因的功能分析第71-74页
     ·osbc1l5基因型雄配子缺陷第71页
     ·osbc1l5基因型花粉发育正常第71-72页
     ·OsBC1L5基因影响水稻花粉管的伸长第72-73页
     ·osbc1l5双链抑制植株育性降低第73-74页
   ·LTW1基因的突变表型及功能分析第74-79页
     ·ltw1突变体的形态特征第74-75页
     ·LTW1基因的克隆第75-77页
     ·LTW1基因等位突变体的鉴定第77页
     ·LTW1基因编码一个"C2 domain-containing"蛋白第77-78页
     ·LTW1基因的表达模式第78-79页
5 讨论第79-87页
   ·水稻突变体库是功能基因组学研究的一个重要工具第79-80页
   ·水稻的OsBC1L基因家族第80-81页
   ·水稻的OsBC1L基因表现多种多样的表达模式第81页
   ·OsBC1L基因间存在一定程度的功能冗余第81-82页
   ·OsBC1L4基因的生物学功能第82-85页
     ·OsBC1L4基因的突变引起了一系列纤维素缺陷的表型第82-83页
     ·OsBC1L4基因主要影响初生壁,它对次生壁的影响是次要的第83-84页
     ·水稻纤维素合成过程存在一系列反馈机制第84-85页
   ·OsBC1L5可能是水稻花粉发育中的一个关键基因第85-86页
   ·LTW1基因的生物学功能和作用机理探讨第86-87页
参考文献第87-102页
附录1:部分试验的详细步骤第102-112页
附录2:个人简历第112-113页
致谢第113-114页

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