| 摘要 | 第9-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-19页 |
| 1.1 低温胁迫对植物的影响 | 第12-13页 |
| 1.1.1 低温胁迫对植物的伤害 | 第12页 |
| 1.1.2 植物响应低温胁迫的生理生化变化 | 第12-13页 |
| 1.1.3 糖代谢与植物低温胁迫 | 第13页 |
| 1.2 miRNA与植物低温胁迫 | 第13-16页 |
| 1.2.1 miRNA简介 | 第13-14页 |
| 1.2.2 miRNA的生物合成 | 第14页 |
| 1.2.3 miRNA的作用机制 | 第14-15页 |
| 1.2.4 miRNA对植物响应低温胁迫的影响 | 第15-16页 |
| 1.3 miRNA的研究方法 | 第16-17页 |
| 1.3.1 miRNA测序方法 | 第16页 |
| 1.3.2 miRNA靶基因的研究方法 | 第16-17页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.2 实验设计与取样 | 第19页 |
| 2.3 实验仪器与试剂 | 第19-20页 |
| 2.3.1 实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.3.2 实验试剂 | 第20页 |
| 2.4 实验方法 | 第20-30页 |
| 2.4.1 生物信息学分析 | 第20-21页 |
| 2.4.2 引物设计 | 第21页 |
| 2.4.3 总RNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.4.4 cDNA第一条链的合成 | 第22页 |
| 2.4.5 qRT-PCR | 第22-23页 |
| 2.4.6 miRNAs的克隆和转化 | 第23-25页 |
| 2.4.7 Pre-tae-miR5049-3p过表达载体的构建 | 第25-26页 |
| 2.4.8 过表达拟南芥植株tae-miR5049-3p及靶基因检测分析 | 第26-28页 |
| 2.4.9 过表达tae-pre-miR5049-3p拟南芥植株抗寒性生理检测 | 第28-30页 |
| 2.5 技术路线 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-48页 |
| 3.1 Dn1调控糖代谢的抗寒相关miRNAs及其靶基因的表达模式分析 | 第31-34页 |
| 3.1.1 Dn1的总RNA提取及反转录 | 第31页 |
| 3.1.2 不同温度下Dn1调控糖代谢的抗寒相关miRNAs及其靶基因的表达模式 | 第31-34页 |
| 3.2 tae-miRNAs及其靶基因的生物信息学分析 | 第34-42页 |
| 3.2.1 Pre-tae-miR5049-3p和Pre-tae-miR1120a的克隆 | 第34-35页 |
| 3.2.2 miRNAs生物信息学分析 | 第35-37页 |
| 3.2.3 靶基因的生物信息学分析 | 第37-42页 |
| 3.3 Pre-tae-miR5049-3p过表达载体的构建及检测 | 第42-43页 |
| 3.3.1 Pre-tae-miR5049-3p植物表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 3.3.2 Pre-tae-miR5049-3p重组质粒的检测 | 第43页 |
| 3.4 Ox-pre-tae-miR5049-3p转化植株的验证 | 第43-48页 |
| 3.4.1 总DNA的提取及pre-tae-miR5049-3p的基因验证 | 第43-44页 |
| 3.4.2 总RNA的提取及其反转录 | 第44-45页 |
| 3.4.3 Ox-pre-tae-miR5049-3p转基因植株及野生型的miR5049-3p半定量检测 | 第45页 |
| 3.4.4 Ox-pre-tae-miR5049-3p转基因植株及野生型6PGL的半定量PCR检测 | 第45-46页 |
| 3.4.5 Ox-pre-tae-miR5049-3p转基因植株的抗寒性生理检测分析 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| 4.1 6PGL与寒胁迫 | 第48页 |
| 4.2 FBA与寒胁迫 | 第48-49页 |
| 4.3 miRNAs与寒胁迫 | 第49页 |
| 4.4 Ox-pre-miR5049-3p与寒胁迫 | 第49页 |
| 4.5 下一步工作展望 | 第49-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第61页 |
