| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-29页 |
| 1.1 研究基因转录的意义 | 第14页 |
| 1.2 基因转录研究现状 | 第14-29页 |
| 1.2.1 哺乳动物细胞中的RNA聚合酶 | 第14-15页 |
| 1.2.2 RNA聚合酶Ⅱ指导的基因转录的研究进展 | 第15-27页 |
| 1.2.3 本课题的目的和意义 | 第27-29页 |
| 第二章 非放射性体外转录实验方法的建立及其应用 | 第29-43页 |
| 2.1 前言 | 第29页 |
| 2.2 实验材料和方法 | 第29-35页 |
| 2.2.1 试剂及其配制 | 第29-30页 |
| 2.2.2 质粒和基因克隆 | 第30-31页 |
| 2.2.3 无细胞系统的体外转录 | 第31-33页 |
| 2.2.4 细胞培养和荧光素酶活性检测实验 | 第33-35页 |
| 2.3 实验结果 | 第35-41页 |
| 2.3.1 DNA模板清除 | 第35-38页 |
| 2.3.2 新方法的建立 | 第38-39页 |
| 2.3.3 体外转录新方法的验证及应用 | 第39-41页 |
| 2.4 讨论与结论 | 第41-43页 |
| 第三章 转录因子ⅡA识别元件在RNA聚合酶Ⅱ指导的基因转录中的调节作用 | 第43-65页 |
| 3.1 前言 | 第43-44页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第44-49页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第44-45页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第45-49页 |
| 3.3 实验结果 | 第49-62页 |
| 3.3.1 在AdML启动子中TFⅡA与 TATA box上游的DNA序列直接结合 | 第49-52页 |
| 3.3.2 TATA box上游的TFⅡA识别元件的获得和它在天然启动子中的普遍性 | 第52-54页 |
| 3.3.3 依赖TATA box启动子的ⅡARE突变抑制TFⅡA招募和启动子活性. | 第54-58页 |
| 3.3.4 ⅡARE在无TATA box的 AdML-ⅡARE启动子中是一个负性调控元件 | 第58-60页 |
| 3.3.5 ⅡARE通过增加Pol Ⅱ、TFⅡA、TAF4和p300在AdML-ⅡARE启动子上招募对转录起到正调控作用 | 第60-62页 |
| 3.4 讨论与结论 | 第62-65页 |
| 第四章 TFⅡA与其识别元件互作调节RNA聚合酶Ⅱ基因转录 | 第65-82页 |
| 4.1 前言 | 第65页 |
| 4.2 实验材料和方法 | 第65-70页 |
| 4.2.1 试剂配制 | 第65-66页 |
| 4.2.2 基因克隆 | 第66-68页 |
| 4.2.3 蛋白质原核表达 | 第68-69页 |
| 4.2.4 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和考马斯亮蓝染色 | 第69页 |
| 4.2.5 HEK293T稳定细胞系的建立 | 第69页 |
| 4.2.6 利用qPCR检测HEK293T TFⅡAα/βWT及其突变体稳定表达细胞系内源基因的表达量 | 第69-70页 |
| 4.3 实验结果 | 第70-80页 |
| 4.3.1 TFⅡAα/β突变减少TFⅡA在启动子AdML上的结合 | 第70-72页 |
| 4.3.2 TFⅡAα/β突变抑制AdML启动子的体外转录活性 | 第72-74页 |
| 4.3.3 TFⅡAα/β突变抑制细胞内AdML-ⅡARE启动子的转录活性 | 第74-76页 |
| 4.3.4 TFⅡAα/β突变抑制天然含ⅡARE启动子的转录活性 | 第76-78页 |
| 4.3.5 TFⅡAα/β突变通过减少TFⅡA、TBP、p300和Pol Ⅱ在 ⅡARE上的招募抑制转录活性 | 第78-80页 |
| 4.4 讨论与结论 | 第80-82页 |
| 第五章 总结与展望 | 第82-84页 |
| 5.1 总结 | 第82-83页 |
| 5.2 展望 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-106页 |
| 附录1 攻读博士学位期间取得的科研成果 | 第106-107页 |
| 附录2 攻读博士学位期间参加的科研项目 | 第107页 |
