| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 前言 | 第10-23页 |
| 1.1 紫杉醇研究简介 | 第10-12页 |
| 1.1.1 紫杉醇发现及研究历史 | 第10页 |
| 1.1.2 紫杉醇分子结构及理化性质 | 第10-11页 |
| 1.1.3 抗癌作用机理 | 第11-12页 |
| 1.2 紫杉醇生产方法 | 第12-18页 |
| 1.2.1 从红豆杉属植物中直接提取 | 第12页 |
| 1.2.2 化学全合成法 | 第12页 |
| 1.2.3 化学半合成法 | 第12-13页 |
| 1.2.4 细胞培养法 | 第13-14页 |
| 1.2.5 内生真菌生物发酵法 | 第14-18页 |
| 1.3 紫杉醇生物合成关键酶基因的研究 | 第18-19页 |
| 1.4 根癌农杆菌法 | 第19-21页 |
| 1.4.1 根癌农杆菌的诱导机制 | 第20页 |
| 1.4.2 根癌农杆菌的遗传转化特点 | 第20页 |
| 1.4.3 影响根癌农杆菌转化效率的因素 | 第20-21页 |
| 1.5 本试验研究的目的意义及主要研究内容 | 第21-23页 |
| 1.5.1 目的意义 | 第21页 |
| 1.5.2 主要研究内容 | 第21-23页 |
| 第2章 材料与方法 | 第23-41页 |
| 2.1 试验材料 | 第23-27页 |
| 2.1.1 菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 载体 | 第23页 |
| 2.1.3 培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.4 生化与分子生物学试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.5 引物 | 第25-26页 |
| 2.1.6 主要仪器与设备 | 第26-27页 |
| 2.2 试验方法 | 第27-41页 |
| 2.2.1 菌株HDFS4-26菌丝体的获得 | 第27页 |
| 2.2.2 菌株HDFS4-26生物合成紫杉醇相关基因克隆 | 第27-33页 |
| 2.2.3 构建重组原核表达载体 | 第33-35页 |
| 2.2.4 基因功能验证 | 第35-36页 |
| 2.2.5 构建高产紫杉醇基因工程菌株 | 第36-39页 |
| 2.2.6 高产紫杉醇基因工程菌株定性分析 | 第39-41页 |
| 第3章 结果与分析 | 第41-55页 |
| 3.1 菌株HDFS4-26总RNA的提取 | 第41页 |
| 3.2 内生真菌紫杉醇相关酶基因的克隆 | 第41-43页 |
| 3.2.1 目的片段的扩增 | 第41-42页 |
| 3.2.2 蓝白筛选 | 第42页 |
| 3.2.3 阳性克隆子质粒PCR鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3 测序及生物信息学分析 | 第43-48页 |
| 3.4 原核表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.4.1 质粒pET32a的提取 | 第48页 |
| 3.4.2 抗性筛选阳性重组子 | 第48-49页 |
| 3.4.3 重组载体的双酶切验证 | 第49页 |
| 3.5 SDS-PAGE检测结果 | 第49-50页 |
| 3.6 Western blotting分析 | 第50-51页 |
| 3.7 构建高产紫杉醇基因工程菌株 | 第51-54页 |
| 3.7.1 目的基因的获得 | 第51-52页 |
| 3.7.2 双元表达载体pBI121-43的提取 | 第52页 |
| 3.7.3 重组质粒的双酶切验证 | 第52-53页 |
| 3.7.4 PCR验证 | 第53-54页 |
| 3.8 TLC检测 | 第54-55页 |
| 第4章 讨论 | 第55-58页 |
| 4.1 紫杉醇内生真菌中相关酶基因的克隆 | 第55-56页 |
| 4.2 基因的表达 | 第56页 |
| 4.3 根癌农杆菌介导法 | 第56-58页 |
| 第5章 结论 | 第58-59页 |
| 第6章 本论文的创新点 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第69-70页 |
| 攻读硕士学位期间参与研究课题情况 | 第70-71页 |