| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 缩略语表 | 第6-9页 |
| 1 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 两栖动物 | 第9-11页 |
| 1.1.1 两栖动物概述 | 第9页 |
| 1.1.2 两栖动物的生存现状 | 第9页 |
| 1.1.3 两栖动物衰退的原因 | 第9-11页 |
| 1.2 东北林蛙 | 第11页 |
| 1.2.1 东北林蛙概述 | 第11页 |
| 1.2.2 东北林蛙的研究进展 | 第11页 |
| 1.3 嗜水气单胞菌 | 第11-12页 |
| 1.3.1 嗜水气单胞菌概述 | 第11-12页 |
| 1.3.2 嗜水气单胞菌对两栖类的威胁 | 第12页 |
| 1.4 TLR4研究 | 第12-15页 |
| 1.4.1 TLRs发现与进展 | 第12-13页 |
| 1.4.2 哺乳动物TLR4信号传导途径 | 第13-14页 |
| 1.4.3 TLR4信号通路转录因子IRF3/IRF7 | 第14-15页 |
| 1.4.4 非哺乳动物TLR4信号通路传导途径 | 第15页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-24页 |
| 2.1 材料 | 第16-17页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第16页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第16页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-23页 |
| 2.2.1 嗜水气单胞菌生长曲线 | 第17页 |
| 2.2.2 人工感染东北林蛙 | 第17-18页 |
| 2.2.3 石蜡切片的制作 | 第18页 |
| 2.2.4 苏木精-伊红(HE)染色方法步骤 | 第18页 |
| 2.2.5 东北林蛙组织采集 | 第18-19页 |
| 2.2.6 组织总RNA提取 | 第19页 |
| 2.2.7 引物设计 | 第19页 |
| 2.2.8 RT-PCR扩增 | 第19-20页 |
| 2.2.9 目的片段分离回收 | 第20-21页 |
| 2.2.10 目的片段的克隆 | 第21页 |
| 2.2.11 质粒回收及测序 | 第21-22页 |
| 2.2.12 实时荧光定量PCR | 第22-23页 |
| 2.3 本章小结 | 第23-24页 |
| 3 结果 | 第24-32页 |
| 3.1 嗜水气单胞菌生长曲线 | 第24页 |
| 3.2 东北林蛙形态观察 | 第24-26页 |
| 3.2.1 解剖学观察 | 第24-25页 |
| 3.2.2 肝脏病理组织切片 | 第25-26页 |
| 3.3 总RNA提取结果 | 第26页 |
| 3.4 RT-PCR扩增结果 | 第26-27页 |
| 3.5 荧光定量PCR退火温度优化结果 | 第27页 |
| 3.6 荧光定量PCR熔解曲线 | 第27-28页 |
| 3.7 嗜水气单胞菌对东北林蛙IRF3和IRF7表达量的影响 | 第28-31页 |
| 3.7.1 嗜水气单胞菌胁迫下东北林蛙IRF3 mRNA表达量变化 | 第28-30页 |
| 3.7.2 嗜水气单胞菌胁迫下东北林蛙IRF7 mRNA表达量变化 | 第30-31页 |
| 3.8 本章小结 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-34页 |
| 4.1 嗜水气单胞菌对东北林蛙致病性 | 第32-33页 |
| 4.1.1 肝组织病理变化 | 第32页 |
| 4.1.2 肝组织病理变化与TLR4信号通路 | 第32-33页 |
| 4.2 东北林蛙免疫机制 | 第33-34页 |
| 4.2.1 TLR4信号通路与LPS | 第33页 |
| 4.2.2 TLR4信号通路中IRF/NF-κB途径 | 第33-34页 |
| 结论 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-41页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
