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柑橘易感溃疡病基因CsLOB1功能的研究

论文摘要第9-12页
Abstract第12-14页
第一章 论文综述第15-33页
    1.1 柑橘溃疡病研究进展第15-19页
        1.1.1 柑橘溃疡病分布第15页
        1.1.2 柑橘溃疡病发病症状第15-16页
        1.1.3 柑橘溃疡病病原第16-17页
        1.1.4 侵染循环与传播途径第17-18页
        1.1.5 柑橘溃疡病鉴定方法第18页
        1.1.6 柑橘溃疡病的防治第18-19页
    1.2 植物防御反应第19-22页
        1.2.1 植物基础防御第19页
        1.2.2 基础免疫反应第19-20页
        1.2.3 R基因介导的免疫反应第20-21页
        1.2.4 系统获得性免疫第21页
        1.2.5 植物对病原微生物的抵御过程第21-22页
    1.3 黄单胞菌致病因子第22-28页
        1.3.1 细菌III型分泌效应因子第22-23页
        1.3.2 黄单胞菌III型分泌型效应因子第23页
        1.3.3 黄单胞菌TAL效应因子第23-24页
        1.3.4 TAL效应因子与植物基因的识别第24-25页
        1.3.5 TAL效应因子功能第25-26页
        1.3.6 PthA4效应因子调控基因第26-28页
        1.3.7 细胞壁相关基因与抗病第28页
    1.4 侧生器官边界结构域基因第28-33页
        1.4.1 侧生器官边界结构域特征第28-29页
        1.4.2 LBD基因功能第29-31页
        1.4.3 LBD基因的表达模式第31页
        1.4.4 LBD基因冗余与多样性第31-33页
第二章 引言第33-37页
    2.1 柑橘溃疡病的经济重要性第33页
    2.2 PthA4是Xcc致病的重要因素第33-34页
    2.3 CsLOB1是Xcc在植物体内的易感基因第34-35页
    2.4 研究的目的和意义第35页
    2.5 研究的主要内容第35-36页
        2.5.1 PthA4基因对柑橘基因组调控的分析第35页
        2.5.2 CsLOB1基因的分子生物学功能性分析第35页
        2.5.3 病毒介导的CsLOB1基因沉默第35-36页
    2.6 实验计划路线图第36-37页
第三章 背景实验分析与验证第37-54页
    3.1 实验材料第37-38页
        3.1.1 植物材料第37-38页
        3.1.2 菌株材料第38页
    3.2 实验方法第38-45页
        3.2.1 Xcc接菌相关实验第38-39页
        3.2.2 基因检测相关方法第39-40页
        3.2.3 载体构建相关方法第40-45页
        3.2.4 原核蛋白表达相关实验第45页
    3.3 结果与分析第45-52页
        3.3.1 PthA4调控基因的验证第45-49页
        3.3.2 PthA4蛋白的诱导表达与纯化第49-50页
        3.3.3 PthA4蛋白与DNA结合互作验证第50-52页
        3.3.4 PthA4靶标基因的预测和分析第52页
    3.4 本章讨论与展望第52-54页
第四章 CsLOB1的基因特征分析第54-64页
    4.1 实验材料第55-56页
        4.1.1 实验植物材料第55页
        4.1.2 实验菌株材料第55页
        4.1.3 载体信息第55-56页
    4.2 实验方法第56-57页
        4.2.1 重组质粒构建第56-57页
        4.2.2 基因表达水平检测第57页
        4.2.3 原生质体准备第57页
    4.3 结果与分析第57-63页
        4.3.1 柑橘LBD家族分析第57-59页
        4.3.2 CsLOB1结构域分析第59-60页
        4.3.3 CsLOB1基因在植物体内的表达模式第60页
        4.3.4 CsLOB1细胞定位第60-62页
        4.3.5 CsLOB1基因的克隆与原核表达第62-63页
    4.4 本章讨论与展望第63-64页
第五章 VIGS介导CsLOB1的基因沉默第64-77页
    5.1 实验材料第65页
        5.1.1 植物材料第65页
        5.1.2 菌株材料第65页
    5.2 实验方法第65-66页
        5.2.1 注射接菌方法第65页
        5.2.2 菌群数变化检测第65页
        5.2.3 基因表达水平检测第65-66页
    5.3 结果与分析第66-75页
        5.3.1 VIGS植物的验证第66-68页
        5.3.2 CsLOB1特异性沉默检测第68-69页
        5.3.3 VIGS抵抗Xcc306侵染能力的分析第69-71页
        5.3.4 CsLOB1在植株内功能性预测第71-72页
        5.3.5 显微结构观察第72-75页
    5.4 本章讨论与展望第75-77页
第六章 诱导型异源表达CsLOB1的分析第77-94页
    6.1 实验材料第77-79页
        6.1.1 实验植物材料第77页
        6.1.2 实验菌株材料第77-78页
        6.1.3 实验载体信息第78页
        6.1.4 实验培养基材料第78-79页
        6.1.5 实验储备液材料第79页
    6.2 实验方法第79-83页
        6.2.1 注射接菌方法第79页
        6.2.2 菌群数变化检测第79-80页
        6.2.3 基因表达水平检测第80页
        6.2.4 转基因植物构建方法第80-83页
    6.3 结果与分析第83-92页
        6.3.1 转基因载体构建第83页
        6.3.2 转基因植物验证第83-85页
        6.3.3 荧光显微镜检测观察第85页
        6.3.4 表型特征观察第85页
        6.3.5 CsLOB1功能被激活后表型验证第85-87页
        6.3.6 荧光显微观察第87-88页
        6.3.7 DEX喷施诱导激活CsLOB1功能第88-89页
        6.3.8 Xcc306接菌后表型观察与分析第89-91页
        6.3.9 CsLOB1诱导基因的推测与验证第91-92页
    6.4 本章讨论与展望第92-94页
第七章 论文主要结果、主要结论、创新点和展望第94-98页
    论文主要研究结果第94-96页
        7.1 PthA4基因的调控相关基因验证第94页
        7.2 PthA4靶标基因进行预测第94页
        7.3 PthA4蛋白原核表达用以研究其RVD特性第94页
        7.4 柑橘LBD家族基因特征第94-95页
        7.5 CsLOB1在柑橘体内的表达模式第95页
        7.6 CsLOB1蛋白细胞定位在细胞核第95页
        7.7 CsLOB1的基因克隆与蛋白的原核表达第95页
        7.8 病毒介导CsLOB1基因沉默植株构建第95-96页
        7.9 DEX诱导CsLOB1异源过量表达转基因植物构建第96页
        7.10 CsLOB1是Xcc在植物体内的易感基因的直接证据第96页
        7.11 CsLOB1诱导基因的检测第96页
    论文主要结论第96页
    创新点与展望第96-98页
参考文献第98-108页
附录I PthA4和CsLOB1序列信息第108-113页
附录II 中英文缩写对照表第113-116页
附录III PthA4靶标基因预测第116-120页
附录IV 实验仪器和试剂盒信息第120-123页
附录IIV 实验所需引物汇总第123-127页
攻读博士期间的科研项目及成果论文第127-130页
致谢第130页

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