论文摘要 | 第9-12页 |
Abstract | 第12-14页 |
第一章 论文综述 | 第15-33页 |
1.1 柑橘溃疡病研究进展 | 第15-19页 |
1.1.1 柑橘溃疡病分布 | 第15页 |
1.1.2 柑橘溃疡病发病症状 | 第15-16页 |
1.1.3 柑橘溃疡病病原 | 第16-17页 |
1.1.4 侵染循环与传播途径 | 第17-18页 |
1.1.5 柑橘溃疡病鉴定方法 | 第18页 |
1.1.6 柑橘溃疡病的防治 | 第18-19页 |
1.2 植物防御反应 | 第19-22页 |
1.2.1 植物基础防御 | 第19页 |
1.2.2 基础免疫反应 | 第19-20页 |
1.2.3 R基因介导的免疫反应 | 第20-21页 |
1.2.4 系统获得性免疫 | 第21页 |
1.2.5 植物对病原微生物的抵御过程 | 第21-22页 |
1.3 黄单胞菌致病因子 | 第22-28页 |
1.3.1 细菌III型分泌效应因子 | 第22-23页 |
1.3.2 黄单胞菌III型分泌型效应因子 | 第23页 |
1.3.3 黄单胞菌TAL效应因子 | 第23-24页 |
1.3.4 TAL效应因子与植物基因的识别 | 第24-25页 |
1.3.5 TAL效应因子功能 | 第25-26页 |
1.3.6 PthA4效应因子调控基因 | 第26-28页 |
1.3.7 细胞壁相关基因与抗病 | 第28页 |
1.4 侧生器官边界结构域基因 | 第28-33页 |
1.4.1 侧生器官边界结构域特征 | 第28-29页 |
1.4.2 LBD基因功能 | 第29-31页 |
1.4.3 LBD基因的表达模式 | 第31页 |
1.4.4 LBD基因冗余与多样性 | 第31-33页 |
第二章 引言 | 第33-37页 |
2.1 柑橘溃疡病的经济重要性 | 第33页 |
2.2 PthA4是Xcc致病的重要因素 | 第33-34页 |
2.3 CsLOB1是Xcc在植物体内的易感基因 | 第34-35页 |
2.4 研究的目的和意义 | 第35页 |
2.5 研究的主要内容 | 第35-36页 |
2.5.1 PthA4基因对柑橘基因组调控的分析 | 第35页 |
2.5.2 CsLOB1基因的分子生物学功能性分析 | 第35页 |
2.5.3 病毒介导的CsLOB1基因沉默 | 第35-36页 |
2.6 实验计划路线图 | 第36-37页 |
第三章 背景实验分析与验证 | 第37-54页 |
3.1 实验材料 | 第37-38页 |
3.1.1 植物材料 | 第37-38页 |
3.1.2 菌株材料 | 第38页 |
3.2 实验方法 | 第38-45页 |
3.2.1 Xcc接菌相关实验 | 第38-39页 |
3.2.2 基因检测相关方法 | 第39-40页 |
3.2.3 载体构建相关方法 | 第40-45页 |
3.2.4 原核蛋白表达相关实验 | 第45页 |
3.3 结果与分析 | 第45-52页 |
3.3.1 PthA4调控基因的验证 | 第45-49页 |
3.3.2 PthA4蛋白的诱导表达与纯化 | 第49-50页 |
3.3.3 PthA4蛋白与DNA结合互作验证 | 第50-52页 |
3.3.4 PthA4靶标基因的预测和分析 | 第52页 |
3.4 本章讨论与展望 | 第52-54页 |
第四章 CsLOB1的基因特征分析 | 第54-64页 |
4.1 实验材料 | 第55-56页 |
4.1.1 实验植物材料 | 第55页 |
4.1.2 实验菌株材料 | 第55页 |
4.1.3 载体信息 | 第55-56页 |
4.2 实验方法 | 第56-57页 |
4.2.1 重组质粒构建 | 第56-57页 |
4.2.2 基因表达水平检测 | 第57页 |
4.2.3 原生质体准备 | 第57页 |
4.3 结果与分析 | 第57-63页 |
4.3.1 柑橘LBD家族分析 | 第57-59页 |
4.3.2 CsLOB1结构域分析 | 第59-60页 |
4.3.3 CsLOB1基因在植物体内的表达模式 | 第60页 |
4.3.4 CsLOB1细胞定位 | 第60-62页 |
4.3.5 CsLOB1基因的克隆与原核表达 | 第62-63页 |
4.4 本章讨论与展望 | 第63-64页 |
第五章 VIGS介导CsLOB1的基因沉默 | 第64-77页 |
5.1 实验材料 | 第65页 |
5.1.1 植物材料 | 第65页 |
5.1.2 菌株材料 | 第65页 |
5.2 实验方法 | 第65-66页 |
5.2.1 注射接菌方法 | 第65页 |
5.2.2 菌群数变化检测 | 第65页 |
5.2.3 基因表达水平检测 | 第65-66页 |
5.3 结果与分析 | 第66-75页 |
5.3.1 VIGS植物的验证 | 第66-68页 |
5.3.2 CsLOB1特异性沉默检测 | 第68-69页 |
5.3.3 VIGS抵抗Xcc306侵染能力的分析 | 第69-71页 |
5.3.4 CsLOB1在植株内功能性预测 | 第71-72页 |
5.3.5 显微结构观察 | 第72-75页 |
5.4 本章讨论与展望 | 第75-77页 |
第六章 诱导型异源表达CsLOB1的分析 | 第77-94页 |
6.1 实验材料 | 第77-79页 |
6.1.1 实验植物材料 | 第77页 |
6.1.2 实验菌株材料 | 第77-78页 |
6.1.3 实验载体信息 | 第78页 |
6.1.4 实验培养基材料 | 第78-79页 |
6.1.5 实验储备液材料 | 第79页 |
6.2 实验方法 | 第79-83页 |
6.2.1 注射接菌方法 | 第79页 |
6.2.2 菌群数变化检测 | 第79-80页 |
6.2.3 基因表达水平检测 | 第80页 |
6.2.4 转基因植物构建方法 | 第80-83页 |
6.3 结果与分析 | 第83-92页 |
6.3.1 转基因载体构建 | 第83页 |
6.3.2 转基因植物验证 | 第83-85页 |
6.3.3 荧光显微镜检测观察 | 第85页 |
6.3.4 表型特征观察 | 第85页 |
6.3.5 CsLOB1功能被激活后表型验证 | 第85-87页 |
6.3.6 荧光显微观察 | 第87-88页 |
6.3.7 DEX喷施诱导激活CsLOB1功能 | 第88-89页 |
6.3.8 Xcc306接菌后表型观察与分析 | 第89-91页 |
6.3.9 CsLOB1诱导基因的推测与验证 | 第91-92页 |
6.4 本章讨论与展望 | 第92-94页 |
第七章 论文主要结果、主要结论、创新点和展望 | 第94-98页 |
论文主要研究结果 | 第94-96页 |
7.1 PthA4基因的调控相关基因验证 | 第94页 |
7.2 PthA4靶标基因进行预测 | 第94页 |
7.3 PthA4蛋白原核表达用以研究其RVD特性 | 第94页 |
7.4 柑橘LBD家族基因特征 | 第94-95页 |
7.5 CsLOB1在柑橘体内的表达模式 | 第95页 |
7.6 CsLOB1蛋白细胞定位在细胞核 | 第95页 |
7.7 CsLOB1的基因克隆与蛋白的原核表达 | 第95页 |
7.8 病毒介导CsLOB1基因沉默植株构建 | 第95-96页 |
7.9 DEX诱导CsLOB1异源过量表达转基因植物构建 | 第96页 |
7.10 CsLOB1是Xcc在植物体内的易感基因的直接证据 | 第96页 |
7.11 CsLOB1诱导基因的检测 | 第96页 |
论文主要结论 | 第96页 |
创新点与展望 | 第96-98页 |
参考文献 | 第98-108页 |
附录I PthA4和CsLOB1序列信息 | 第108-113页 |
附录II 中英文缩写对照表 | 第113-116页 |
附录III PthA4靶标基因预测 | 第116-120页 |
附录IV 实验仪器和试剂盒信息 | 第120-123页 |
附录IIV 实验所需引物汇总 | 第123-127页 |
攻读博士期间的科研项目及成果论文 | 第127-130页 |
致谢 | 第130页 |