| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1 溶藻弧菌 | 第12页 |
| 1.2 Ⅵ型分泌系统 | 第12-22页 |
| 1.2.1 T6SS概述 | 第12-13页 |
| 1.2.2 T6SS结构和组装 | 第13-17页 |
| 1.2.3 T6SS功能 | 第17-18页 |
| 1.2.4 T6SS调控 | 第18-22页 |
| 1.3 本课题的研究内容和意义 | 第22-24页 |
| 第2章 溶藻弧菌T6SS杀菌功能的鉴定 | 第24-46页 |
| 2.1 前言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-29页 |
| 2.2.1 菌株、质粒及培养条件 | 第24-26页 |
| 2.2.2 引物 | 第26-28页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第28-29页 |
| 2.2.4 常用分析软件 | 第29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-31页 |
| 2.3.1 菌株构建 | 第29-30页 |
| 2.3.2 鱼体内竞争实验 | 第30页 |
| 2.3.3 激光共聚焦检测 | 第30页 |
| 2.3.4 杀菌实验 | 第30页 |
| 2.3.5 qRT-PCR实验 | 第30-31页 |
| 2.3.6 Western blot检测 | 第31页 |
| 2.3.7 数据分析 | 第31页 |
| 2.4 实验结果 | 第31-44页 |
| 2.4.1 溶藻弧菌T6SS不介导对鱼体的毒力 | 第32页 |
| 2.4.2 影响溶藻弧菌杀菌能力因素的研究 | 第32-35页 |
| 2.4.3 溶藻弧菌对多种细菌具有杀伤作用 | 第35-37页 |
| 2.4.4 溶藻弧菌的杀菌能力主要依赖于T6SS2 | 第37-42页 |
| 2.4.5 溶藻弧菌的杀菌能力依赖于QS的调控 | 第42-44页 |
| 2.5 讨论 | 第44-45页 |
| 2.6 本章小结 | 第45-46页 |
| 第3章 苏氨酸/丝氨酸磷酸化参与的对溶藻弧菌T6SS的调控 | 第46-80页 |
| 3.1 前言 | 第46页 |
| 3.2 实验材料 | 第46-53页 |
| 3.3 实验方法 | 第53-57页 |
| 3.3.1 磷酸化蛋白质组 | 第53-55页 |
| 3.3.2 Phos-tag实验 | 第55页 |
| 3.3.3 镍柱蛋白纯化 | 第55-56页 |
| 3.3.4 Pull-down实验 | 第56页 |
| 3.3.5 运动性检测 | 第56-57页 |
| 3.3.6 生物被膜检测 | 第57页 |
| 3.4 实验结果 | 第57-77页 |
| 3.4.1 溶藻弧菌的杀菌能力依赖于PpkA2的调控 | 第57-58页 |
| 3.4.2 磷酸化质谱鉴定潜在的PpkA2磷酸化的底物蛋白 | 第58-60页 |
| 3.4.3 PpkA2的自磷酸化影响T6SS2活性 | 第60-63页 |
| 3.4.4 p-DotU2通过与Fha2相互作用影响T6SS2活性 | 第63-65页 |
| 3.4.5 p-VtsR影响T6SS2活性 | 第65-71页 |
| 3.4.6 p-VtsR通过调控QS影响T6SS2活性 | 第71-75页 |
| 3.4.7 p-VtsR调控溶藻弧菌运动性和生物被膜 | 第75-76页 |
| 3.4.8 T6SS2通过磷酸化传递及QS调控毒力的模型 | 第76-77页 |
| 3.5 讨论 | 第77-79页 |
| 3.6 本章小结 | 第79-80页 |
| 第4章 PppA磷酸酶参与的对溶藻弧菌T6SS的调控 | 第80-92页 |
| 4.1 前言 | 第80页 |
| 4.2 实验材料 | 第80-83页 |
| 4.3 实验方法 | 第83-84页 |
| 4.4 实验结果 | 第84-90页 |
| 4.4.1 PppA第253位苏氨酸被磷酸化 | 第84-85页 |
| 4.4.2 PpkA2调控PppA的磷酸酶活性 | 第85-86页 |
| 4.4.3 p-PppA调控T6SS2的杀菌活力 | 第86页 |
| 4.4.4 p-PppA磷酸化调控T6SS2的表达 | 第86-88页 |
| 4.4.5 p-PppA通过调控LuxR影响T6SS2的表达 | 第88页 |
| 4.4.6 p-PppA调控T6SS2的模型 | 第88-90页 |
| 4.5 讨论 | 第90-91页 |
| 4.6 本章小结 | 第91-92页 |
| 第5章 利用转座子文库技术研究PppA调控LuxR的分子机制 | 第92-104页 |
| 5.1 前言 | 第92页 |
| 5.2 实验材料 | 第92页 |
| 5.3 实验方法 | 第92-96页 |
| 5.3.1 转座子受体菌株构建 | 第92-94页 |
| 5.3.2 转座子随机插入突变株构建预实验 | 第94-95页 |
| 5.3.3 Tail-PCR实验 | 第95页 |
| 5.3.4 转座子随机插入突变株构建 | 第95页 |
| 5.3.5 最低抑制浓度(MIC)实验 | 第95页 |
| 5.3.6 转座子随机插入突变株的条件筛选及基因组抽提 | 第95页 |
| 5.3.7 转座子文库的构建 | 第95-96页 |
| 5.4 实验结果 | 第96-102页 |
| 5.4.1 PppA在转录水平正调控luxR和rpoE | 第96-97页 |
| 5.4.2 转座子随机插入突变株的构建 | 第97-99页 |
| 5.4.3 Tn-seq筛选PppA正调控luxR和rpoE的潜在蛋白 | 第99-102页 |
| 5.5 讨论 | 第102-103页 |
| 5.6 本章小结 | 第103-104页 |
| 第6章 结论与展望 | 第104-107页 |
| 6.1 主要结论 | 第104-105页 |
| 6.2 论文创新点 | 第105页 |
| 6.3 展望 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-117页 |
| 附录1 pluxR-Cm/EPGS和pluxR-Cm/ΔpppA随机插入突变文库比对 | 第117-118页 |
| 附录2 prpoE-Cm/EPGS和prpoE-Cm/ΔpppA随机插入突变文库比对 | 第118-119页 |
| 附录3 缩略词汇总 | 第119-120页 |
| 攻读博士学位期间的论文成果 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121页 |
